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大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J實驗結(jié)果計數(shù)和細胞培養(yǎng)操作步驟
2019-1-25 閱讀(142)
| 提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 14.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 142次 |
大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J 實驗結(jié)果計數(shù)：
（1）將血球計數(shù)板及蓋片擦干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板上。
（2）將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間。
（3）靜置3分鐘。
（4）鏡下觀察，計算計數(shù)板四大格細胞總數(shù)，壓線細胞只計左側(cè)和上方的，然后按下式計算：
細胞數(shù)/ml=4大格細胞總數(shù)/4*10000
注意：鏡下偶見由兩個以上細胞組成的細胞團，應(yīng)按單個細胞計算，若細胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液
大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J 細胞培養(yǎng)操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量，使的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
