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所在地區(qū):山東青島市

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技術(shù)文章

土壤纖維素酶(Solid-case,S-CL)測(cè)定試劑盒說明書

閱讀:750發(fā)布時(shí)間:2018-12-3

土壤纖維素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性測(cè)定試劑盒說明書

分光光度法 50管/24樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

S-CL主要來源于土壤微生物,S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

測(cè)定原理:

采用蒽酮比色法測(cè)定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允許快遞)

和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:甲苯10mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

試劑二:液體6mL×1 瓶,4保存;

試劑三:液體40mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1 瓶,4保存; 臨用前加入5mL 蒸餾水和45mL 濃硫酸充分溶解待用。

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干,過30~50 目篩。

加樣表和測(cè)定步驟:

對(duì)照管 測(cè)定管

風(fēng)干土樣(g 0.1 0.1

試劑一 (μL) 100 100

振蕩混勻15min

試劑二(μL  180

試劑三(μL  740 740

蒸餾水(μL  360 180

37℃振蕩反應(yīng)3h 后,90℃水浴15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后

8000g 25℃離心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μL) 350 350

試劑四 (μL) 650 650

混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,620nm 處蒸餾水調(diào)零,測(cè)定吸光值

A,計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-CL 活力計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

單位的定義:每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL 活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T:反應(yīng)時(shí)間,3h=1/8d V 反總:反應(yīng)體系總體積:1.2mL;W:樣本質(zhì)量,0.1g。


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