定量測(cè)試方法主要應(yīng)用于藥物、食品、化工等行業(yè)，用于定量測(cè)定某一特定物質(zhì)或多種物質(zhì)。在選擇物質(zhì)定量分析方案時(shí)，需要考慮多種關(guān)鍵因素，如樣品體系、目標(biāo)物的性質(zhì)、樣品矩陣、靈敏度和檢出限、準(zhǔn)確度和精密度、分析速度和成本，操作難度等。以上因素眾多，故選擇合適的定量分析方法尤其重要。
定量是指利用檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)（色譜，光譜峰面積或峰高）與待測(cè)組分的量（質(zhì)量或濃度）成正比定量。
有機(jī)目標(biāo)物定量可按照下圖選擇定量方案：
儀器方案定好后，為了定量更準(zhǔn)確，還需要選擇一種或多種適合目標(biāo)化合物定量分析的方法，在實(shí)際操作中，最好對(duì)比不同方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。
常見的定量分析方法有：歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法等。
一、 歸一化法
將所有出峰組分的含量之和按100%計(jì)的定量方法，稱為面積歸一法。
歸一法使用時(shí)需要滿足三個(gè)條件
1、樣品中所有組分都能從色譜柱流出
2、所有組分都能被檢測(cè)器檢出
3、能測(cè)定或查出所有組分相對(duì)校正因子
各組分含量的計(jì)算公式如下：
式中：C：含量 F：校正因子 A：表示峰面積
若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，當(dāng)樣品中組分是同分異構(gòu)體或同系物，Fi都很相近。
在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：
案例1 ： 當(dāng)樣品主成分含量大于50%面積歸一定量結(jié)果如下圖
圖2 丙酮GC-FID純度分析
外標(biāo)法又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線法。取待測(cè)組分的純物質(zhì)配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，繪制峰面積與標(biāo)樣含量的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并擬合二者的線性方程式。
在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：
案例2：目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)品，用外標(biāo)法定量時(shí)結(jié)果如下圖
圖3 測(cè)樣品中對(duì)二甲苯的準(zhǔn)確含量，上圖為標(biāo)準(zhǔn)曲線
目前微譜已經(jīng)積累的成熟外標(biāo)定量方法見表1
表1 化合物外標(biāo)法定量典型案例表
選擇適宜的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，準(zhǔn)確稱量后加入待測(cè)樣品中，根據(jù)組分和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值以及內(nèi)標(biāo)加入量進(jìn)行定量。
在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：
內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分，否則會(huì)使峰重疊而無法準(zhǔn)確測(cè)量內(nèi)標(biāo)物的峰面積。
內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間應(yīng)與待測(cè)組分相近，但彼此能分離(R≥1.5)。
內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。
內(nèi)標(biāo)物需要準(zhǔn)確稱量，其加入量要與被測(cè)組分的含量接近。
案例3：內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，為了排除樣品基質(zhì)干擾，用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)結(jié)果如下圖
標(biāo)準(zhǔn)加入法又稱疊加法，實(shí)際是一種特殊的內(nèi)標(biāo)法。以待測(cè)組分的純物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物，加入到待測(cè)樣品中，然后在相同的色譜條件下，測(cè)定加入內(nèi)標(biāo)物前后待測(cè)組分的峰面積，從而計(jì)算待測(cè)組分的含量。
在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：
標(biāo)準(zhǔn)加入法每一個(gè)樣品都要配制三個(gè)以上的、含樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的混合溶液，因此，這種方法不適于大批樣品的分析。在難以找到合適內(nèi)標(biāo)物時(shí)，可作為內(nèi)標(biāo)法的一種延伸。
定量分析要求目標(biāo)組分都必須分離，能被檢測(cè)器檢測(cè)到，并且濃度在檢測(cè)器的線性范圍內(nèi)，不同方法適用于不同要求。
圖5 定量方法選擇導(dǎo)圖
外標(biāo)法是所有定量方法的基礎(chǔ)，可以精確進(jìn)樣量的情況下，常規(guī)分析通常都采用外標(biāo)法。
歸一化法不要求精確進(jìn)樣量，但要求所有組分都必須出峰，或者所有出峰組分的總含量已知。歸一化法也可用于外標(biāo)法定量后，對(duì)總量進(jìn)行歸一化誤差修正。
內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是要能夠找到合適的內(nèi)標(biāo)物。內(nèi)標(biāo)法的稱量引起的誤差小于色譜正常定量分析誤差，內(nèi)標(biāo)和目標(biāo)物結(jié)構(gòu)差異大時(shí)常需要校正。
標(biāo)準(zhǔn)加入法常用來輔助判定假陽性，這種方法可以消除基體干擾。
目標(biāo)物定量，可快速推薦合適的分析儀器和定量方案。
微譜針對(duì)不同樣品體系、不同目標(biāo)物已積累多種成熟的研發(fā)方法。
可按需做方法開發(fā)和驗(yàn)證。
可根據(jù)不同的樣品體系，開發(fā)和研發(fā)合適的前處理方法。
微譜針對(duì)客戶不同樣品體系、不同目標(biāo)物已積累多種成熟的研發(fā)方法，并根據(jù)客戶的需求提供專業(yè)、個(gè)性化的分析、檢測(cè)等一站化服務(wù)。
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