紫外可見分光光度計(jì)是一種很重要的分析儀器,在使用一臺新的紫外可見分光光度計(jì)儀器前,一般需要先對儀器的線性度進(jìn)行測試。但大多數(shù)使用者只是在某一試樣的某一濃度附近,用濃度的倍數(shù)變化來測出這一段的線性度。這只能反映儀器在小范圍內(nèi)的使用情況,并不能說明儀器的線性度是否符合出廠指標(biāo),也不能反映儀器的線性范圍。因此,在儀器使用前對其線性度的測試有著重要的意義！
如果儀器使用在非線性區(qū)，肯定會因非線性而產(chǎn)生誤差。為了保證分析測試結(jié)果的可靠性，應(yīng)使用在儀藉的線性區(qū)。使用者總是希望對很稀的樣品分析時(shí)，其分析測試的結(jié)果在所要求的誤差范圍內(nèi)。
對很濃的樣品分析時(shí)，其分析測試的結(jié)果也在所要求的誤差范圍內(nèi)；這就只有儀器的線性動態(tài)范圍很寬的時(shí)候才能做到。有人認(rèn)為樣品可以進(jìn)行濃縮或稀釋處理，但這樣不僅增加工作量、操作煩瑣，還會帶來誤差。所以我們總是希望分光光度計(jì)的線性動態(tài)范圍大者好。
線性動態(tài)范圍的定義是：zui大線性區(qū)（保證相對誤差的線性區(qū)域）的吸光度值A(chǔ)max， 除以zui小線性區(qū)（保證1%相對誤差的線性區(qū)域）的吸光度值A(chǔ)min。即LDR=Amax/Amin ；或zui大線性區(qū)（保證1%相對誤差的線性區(qū)域）的濃度Crnax除以zui小線性區(qū)（保證1%相對誤差的線性區(qū)域）的濃度cmin，即：LDR=Cmax/Cmin。
紫外可見分光光度計(jì)的線性動態(tài)范圍取決于儀器的雜散光和噪聲。因?yàn)?，雜散光是儀器分析測試誤差的主要來源，它限制被分析測試樣品濃度的上限。
另外噪聲也是光度計(jì)誤差的主要來源之一。它限制被分析樣品濃度的下限。許多高檔紫外可見分光光度計(jì)都給出儀器的光度噪聲，高檔的儀器光度噪聲可達(dá)±O．0002。所以高精度的紫外可見分光光度計(jì)線性動態(tài)范圍很寬（或能分析的樣品的濃度很低時(shí)，還可保證在誤差范圍內(nèi)）。有的噪聲大多在±o．002左右。因此線性動態(tài)范圍就較窄（能保證1%相對誤差時(shí)的濃度下限較大，或下限濃度較高）。
雜散光的影響要比噪聲小，并且雜散光影響的是高濃度時(shí)的分析誤差，而噪聲是影響低濃度時(shí)的分析誤差；所以不管是儀器的設(shè)計(jì)還是使用都應(yīng)該注意到這一點(diǎn)。
測試方法
分光光度計(jì)線性度測試的方法很多,常用的方法大致有[4]:
(1)溶液稀釋法:將重鉻酸鉀稀釋到不同濃度,測量不同波長處的吸光度(一般需測85個(gè)吸光度值),然后根據(jù)此數(shù)據(jù)作曲線,判斷線性度。
(2)中性濾波片法:一般以3塊中性濾波片疊加,比較測定值與計(jì)算值之差來判斷線性度。
(3)百分法:使被測試樣濃度成倍增加,測其吸光度并作曲線,判斷實(shí)驗(yàn)值偏離比爾定律直線部分的程度。
(4)改變池厚法:用不同厚度的樣品池來測量重鉻酸鉀的吸光度,以此觀察光度計(jì)的線性度。
(5)旋轉(zhuǎn)扇形板法:將不同透射率的扇形板置于樣品光束中旋轉(zhuǎn),測出各點(diǎn)透射率并與真值進(jìn)行比較。
(6)光疊加法:利用雙孔規(guī)來分段測量,然后用曲線判斷線性度。
綜上所述，紫外可見分光光度計(jì)的線性動態(tài)范圍非常重要，它將限制儀器的使用范圍（即限制儀器的適用性）。因此不管制造者還是使用者，都必須對儀器的線性動態(tài)范圍引起高度重視，才能提高儀器的水平。才能提高使用者的分析測試技術(shù)水平。
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