TTC，即2,3,5-氯化三苯基四氮唑，是一種脂溶性光敏感復(fù)合物。它是呼吸鏈中吡啶-核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，能與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)，生成紅色的甲臜(三苯基甲臢，TTF)，該物質(zhì)不溶于水，因此可以用來(lái)表示細(xì)胞的活力。而缺血或壞死的組織內(nèi)脫氫酶活性下降或喪失，不能與TTC反應(yīng)，故不會(huì)產(chǎn)生顏色變化，保持蒼白。
 

　　基本原理
 

　　化學(xué)作用：
 

　　TTC(Triphenyltetrazolium chloride)是一種無(wú)色可溶性化合物，可被活細(xì)胞中的脫氫酶(如琥珀酸脫氫酶)還原，生成紅色不溶性的三苯甲臜(Formazan)。
 

　　反應(yīng)式：
 

　　TTC(無(wú)色) + 脫氫酶(活性細(xì)胞) → Formazan(紅色沉淀)
 

　　關(guān)鍵條件：依賴(lài)細(xì)胞線粒體功能，僅存活且代謝活躍的組織能完成此反應(yīng)。
 

　　染色結(jié)果判讀：
 

　　紅色區(qū)域：活細(xì)胞(脫氫酶活性正常)。
 

　　白色/蒼白色區(qū)域：壞死或凋亡細(xì)胞(脫氫酶失活，無(wú)法還原TTC)。
 

　　實(shí)驗(yàn)步驟
 

　　樣本準(zhǔn)備：
 

　　組織類(lèi)型：心肌、腦、肝臟等(常用于缺血再灌注損傷模型)。
 

　　處理要求：新鮮樣本(避免固定)，迅速切片(厚度通常為1-2 mm)。
 

　　TTC溶液配制：
 

　　常用濃度：1-2% TTC溶于生理鹽水或PBS(pH 7.4)。
 

　　避光保存：TTC對(duì)光敏感，需現(xiàn)用現(xiàn)配或短期4℃避光儲(chǔ)存。
 

　　染色流程：
 

　　將組織切片浸沒(méi)于TTC溶液中，37℃避光孵育15-30分鐘(具體時(shí)間依組織類(lèi)型調(diào)整)。
 

　　翻轉(zhuǎn)組織確保均勻接觸。
 

　　終止反應(yīng)：PBS漂洗，4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定(可選)。
 

　　觀察與記錄：
 

　　肉眼或顯微鏡下觀察，紅色為存活區(qū)，白色為壞死區(qū)。
 

　　定量分析：使用圖像分析軟件(如ImageJ)計(jì)算壞死區(qū)域占比。