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mRNA為單股，一般會(huì)卷繞成特定的三級(jí)結(jié)構(gòu)，并與某些蛋白質(zhì)結(jié)合，而以messengerribonucleoproteinparticles（mRNPs）的型式存在于細(xì)胞內(nèi)；自細(xì)胞抽取RNA時(shí)，一般會(huì)以...
1簡(jiǎn)介DEAE-纖維素，它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物，表面又用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高載量，同時(shí)又具有更好的分辨率。...
方法步驟：1）經(jīng)BamHI及HindIII作用的pBlueGus及pQE31，置65℃水浴10min，移至冰浴降溫后，以含EtBr的1.0%agarosegel進(jìn)行電泳。2）NA45以滅過菌的剪刀剪成...
方法步驟：1）經(jīng)BamHI及HindIII作用的pBlueGus及pQE31，置于65℃水浴10min，移至冰浴降溫后，以含EtBr的1.0%agarosegel進(jìn)行電泳（兩種樣品各用六個(gè)wells，...
方法步驟：1）前一天進(jìn)行轉(zhuǎn)形的培養(yǎng)皿，當(dāng)菌落長(zhǎng)至約0.5mm大小時(shí)，將培養(yǎng)皿移至4℃放置至少1h。2）準(zhǔn)備一張無菌的硝化纖維濾膜，以鉛筆在邊緣標(biāo)上組別。◆請(qǐng)戴手套后再拿取濾膜！3）打開培養(yǎng)皿蓋子，以兩...
方法步驟：◆注意！進(jìn)行這一部份實(shí)驗(yàn)的前，請(qǐng)先確定pBlueGus/HindIII與pBlueGus/BamHI兩者的酵解反應(yīng)都已經(jīng)*。1）于酵解反應(yīng)#1與#2的微量離心管分別加入182μL去離子水。2...
[方法]1．配制1個(gè)50ul連接混合液，包含：●10×連接緩沖液，5uI●水，16ul●NcoI和NotI消化的pHENl（100g／ul），20ul●VcoI和NotI消化的scFv文庫（100g/...
[方法]1．設(shè)計(jì)并合成含有CDR3隨機(jī)化序列的VHFOR引物。當(dāng)然必須以擬進(jìn)行親和力成熟的抗體VH基因作為設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)。本例中，VHCDR3的7個(gè)氨基酸被隨機(jī)化。在每個(gè)隨機(jī)化位點(diǎn)中，保留了大約50％野生...
[方法]1．配制50ulPCR反應(yīng)混合液，包含：●水，34．5ul●20XdNTP（每種5mmol／L），2，5ul●10XVent聚合酶緩沖液，5．0ul●LMB3引物（10pmol/u1），2．5...
在基于結(jié)合動(dòng)力學(xué)，也被稱為解離速率（κoff）]的選擇中，在將遠(yuǎn)遠(yuǎn)過量的非標(biāo)記抗原加入到混合液中并維持一段特定時(shí)間之前，將首先選用飽和量的標(biāo)記抗原使其與噬菌體群結(jié)果。通過確定與末標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)的持續(xù)的時(shí)...
（1）蛋白酶消化蛋白酶消化可以去除覆蓋于抗原決定簇表面的雜蛋白，更為重要的是因甲醛固定而引起的交聯(lián)被打開，有利于抗原—抗體的結(jié)合，提高陽性檢測(cè)率。（2）抗原修復(fù)選擇適宜的修復(fù)液（pH值、離子濃度）、修...
①膠體金溶液可以重復(fù)制備，其顆粒大小可以控制，可較容易進(jìn)行免疫電鏡的雙重或多重標(biāo)記；②金標(biāo)探針有很高的電子密度，有特殊的分辨率，定位準(zhǔn)確；③金標(biāo)探針能發(fā)射二次電子和反射電子，是掃描電鏡目前的標(biāo)記物；④...
膠體金可用多種方法制備，其中應(yīng)用較為廣泛的是化學(xué)還原法。這一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的還原劑，使金離子還原為金原子，可用于制備膠體金的還原劑有50余種，但在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)zui為常用...
乙醇—超聲波還原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。（2）用0．2m01/LK2C03調(diào)pH至7．2，再加入lml無水乙醇。...
[方法]1．建立以下連接反應(yīng)：●載體DNA（pG6AppG6B，pG6C）（10ug）xul●cDNA片段（3～5ug）yul●10×連接緩沖液40ul●T4DNA連接酶（6WeissU/ul）5ul...
[方法]1．加2～3ul純化的連接反應(yīng)物（zui大值為0.3ugDNA）到80ul的*0F’電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕搖晃混合。使用30ng（2ul）的pUCl9控制電轉(zhuǎn)化效率。2．將細(xì)胞+DNA懸浮液...
[方法]1．在0．5ml微量離心管中配制50ulPCR反應(yīng)混合液，包括：●Millipore水，31.5ul●10×VentDNA聚合酶緩沖液，5．0ul●20×dNTP，2．5ul●正向引物，2．0...
[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制以下PCR反應(yīng)混合液。配制成2個(gè)“反應(yīng)管”，1個(gè)含有V。文庫DNA，另1個(gè)則含有Vl文庫DNA。反應(yīng)管對(duì)照1對(duì)照2●scFV接頭DNA（100ng/ul）1．0...
[方法]1．在0．5ml微量離心管中，配制兩個(gè)50/z1PCR反應(yīng)混合液（1個(gè)用于VH—VκscFv文庫，另1個(gè)用于Vu—VλscFv文庫），其中含有：●水，36．5//1●10XTag緩沖液，5．0...
[方法]1，配制兩個(gè)100ulPCR反應(yīng)混合液來消化scFV文庫，其中1個(gè)用于VH-VκscFv文庫，另1個(gè)用于VH-VλscFv文庫，該混合液含有：●scFVDNA（1～4ug），50ul●水，33...
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