士鋒生物血細胞的分離

時間：2014-10-15閱讀：577

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血細胞由紅細胞,白細胞,血小板等組成.實驗中常用白細胞來做研究,如炎癥滲出,細胞遷移,識別等都涉及到白細胞.白細胞又分為:粒細胞,淋巴細胞,單核細胞等.它們具有不同的功能.實驗中常需要分離血細胞方能進行。

這里主要論述人外周白細胞的分離，主要是中性粒細胞（Neutrophil），淋巴細胞（Lymphocyte），單核細胞（Monocyte）的分離。其它骨髓，脾淋巴細胞等分離可參，不同種屬間請注意分離液的選擇。

細胞分離中需要注意的幾個問題

1.如果您要做細胞培養(yǎng)，記住實驗中所用的試劑（分離液，洗滌液等）、器械等都要是無菌消毒的，并注意實驗中的無菌操作。

2. 離心轉(zhuǎn)速單位及時間：目前國外的文獻報道基本上用g為單位，注意g和轉(zhuǎn)速（rpm）的換算。

3.離心溫度：有的要求室溫，有的要求4攝氏度。實驗的操作要求盡可能熟練，連貫。

4.在用Ficoll分離單個核細胞（PBMC）時，通常含有少量的紅細胞，對于一般的實驗影響不大，如果實驗要求較高，可采取裂解液（有的需要無菌），并注意裂解時間控制，以免影響單個核細胞的活性。

5. 在用Percoll配不連續(xù)梯度時（一般用高滲NaCl），注意各成份體積的準確性，否則密度與預(yù)期的不一樣，影響分離效果。

6.用全血離心效果比全血稀釋后再離心效果差，稀釋一般等體積稀釋一倍。

7.分離液與樣本的體積比：一般應(yīng)小于1：2（即一般為1體積分離液，2體積樣本，不宜超過2體積，小于2體積均可）

8.洗滌液的成分：不同文獻報道不一，有的使用PBS，有的為Hank’s，KRP等，可自己選定。主要是離子濃度及成份的不同，有的含有Mg2+,Ca2+。

9. 細胞活性：0.2%臺盼藍染色3－5分鐘，鏡下觀察計數(shù)死亡細胞（藍染）。

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