一、原理

細(xì)胞融合(Cell fusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學(xué)的)使兩個或兩個以上的細(xì)胞合并形成一個細(xì)胞的過程。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，在六十年代作為一門新興技術(shù)而發(fā)展起來。由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個領(lǐng)域。

細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎?、簡便，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機(jī)制尚不*清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。

二、方法

(1)取新鮮雞血以0.85％生理鹽水制成10％的懸液。

(2)稱取0.5克PEG(MW=4,000)放入試管內(nèi)，在酒精燈上融化之，迅速加入0.5ml預(yù)熱的Hanks液混勻制成50％的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。

(3)取上述10％的雞紅細(xì)胞懸液1ml放入離心管中，再加入5ml  Hanks液混勻，然后以1,000rpm離心5分鐘，小心棄去上清，用指彈法將細(xì)胞團(tuán)塊彈散。

(4)取上述50％PEG溶液0.5ml，在1分鐘內(nèi)滴加到雞紅細(xì)胞懸液，邊加邊輕輕搖動混勻。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過程都要求在37℃水浴內(nèi)進(jìn)行。

(5)緩慢滴加9ml Hanks液以終止PEG的作用，在37℃水浴內(nèi)靜置5分鐘。

(6)離心棄上清后，取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。

三、結(jié)果觀察

在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個異核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。

四、融合率的計(jì)算

在高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)200個細(xì)胞(包括融合的與未融合的細(xì)胞)，以融合細(xì)胞(含兩個或兩個以上的細(xì)胞核的細(xì)胞)的細(xì)胞核數(shù)除以總細(xì)胞核數(shù)(包括融合與未融合的細(xì)胞核)即得出融合率。