urkat細(xì)胞（人外周血白血病T細(xì)胞），是一種懸浮細(xì)胞。我的經(jīng)驗(yàn)如下：

1、培養(yǎng)液：RPMI1640，15％小牛血清，2％Na2CO3，1％HEPES，100IU／1ml，100IU／ml；

2、培養(yǎng)條件：5％CO2，37度，30％濕度；

3、細(xì)胞復(fù)蘇：要快速將凍存管放入37度水中，不斷輕輕搖晃，直到細(xì)胞*溶解，加入10ml左右的培養(yǎng)液，800～1000rpm，10分鐘離心，之后倒掉液體，加入新的培養(yǎng)基就可以進(jìn)行培養(yǎng)了；

4、細(xì)胞培養(yǎng)：起初進(jìn)行傳代時(shí)由于細(xì)胞剛剛復(fù)蘇，長(zhǎng)得比較慢，所以可以3～4天傳一代，傳過(guò)兩代后，一般2～3天傳一代，每次傳代后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，在傳過(guò)幾代合適的時(shí)候可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

5、細(xì)胞凍存：1000rpm離心后，棄去液體，加入含有15％DMSO的凍存液，按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－80℃ 1小時(shí)）→液氮。

6、我在做細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一些小經(jīng)驗(yàn)：

（1）細(xì)胞培養(yǎng)箱在每使用1個(gè)月用酒精擦洗一次，這樣可以減少污染；

（2）雖然說(shuō)加樣器放在紫外下照射會(huì)不準(zhǔn)，但我們還是丟了一把1ml的加樣器在超凈臺(tái)，沒(méi)有拿出來(lái)過(guò)，我想這樣也許會(huì)減少污染；

（3）小牛血清我們用的是國(guó)產(chǎn)的，所以在一開始的時(shí)候加了15％的小牛血清，但細(xì)胞總是長(zhǎng)不好，后來(lái)摸索條件，把小牛血清的量調(diào)到了20％，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛；

（4）HEPES雖然貴點(diǎn)，但加上去后細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的不錯(cuò)；

（5）在超凈臺(tái)操作前要用0.1％的新潔爾滅或75%酒精擦手。