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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

重組DNA的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2015-12-21閱讀:692
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實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
制備出感受態(tài)細(xì)胞,把體外重組的DNA引入受體細(xì)胞,使受體菌具有新遺傳性,并從中選擇出轉(zhuǎn)化子。

實(shí)驗(yàn)原理 
感受態(tài)就是細(xì)菌吸收轉(zhuǎn)化因子的生理狀態(tài),只有發(fā)展為感受態(tài)的細(xì)胞才能穩(wěn)定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區(qū)域當(dāng)有dna片段插入時(shí),LacZ基因失活,轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌并在含有IPTG和X-gal培養(yǎng)基生長(zhǎng)時(shí),會(huì)產(chǎn)生白色的克隆,不含插入片段的pUC18質(zhì)粒進(jìn)入宿主細(xì)胞生成藍(lán)色菌落。 

實(shí)驗(yàn)操作 
(一)受體菌的培養(yǎng)與CaCl2處理(無菌操作) 
1、取0.3ml種子液接到裝有30 ml LB液體培養(yǎng)基的三用瓶中,振蕩培養(yǎng)2-2.5小時(shí) 
2、取出一定量菌液置于冰浴10分鐘 
3、4,000rpm,4℃離心5分鐘,收集菌體 
4、把菌體懸浮在4 ml 100mM冷CaCl2中,冰浴25分鐘。 
5、5,000rpm,4℃離心5分鐘,收集菌體 
6、再把菌體懸浮在1ml 100 mM冷CaCl2中置4 ℃ 12-24小時(shí),備用。 

(二)倒皿鋪平板 
1、按照各組轉(zhuǎn)化反應(yīng)的混合物 
控制不同的選擇性培養(yǎng)基(20 ml/皿) 
LB固體培養(yǎng)基(100 ml)+Amp(60μg/ml)+Tet(40μg/ml)供連接混合物轉(zhuǎn)化,pUC18轉(zhuǎn)化用, 共5皿 
LB固體培養(yǎng)基 (100 ml)+Amp (60μg/ml)+X-gal (40μg/ml)+IPTG(24μg/ml),供連接混合物轉(zhuǎn)化,pUC18轉(zhuǎn)化用,共5皿 
2、轉(zhuǎn)化反應(yīng)前一天,先鋪好平板 
3、取各組反應(yīng)物在平板上涂布 
4、培養(yǎng)皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中過夜 
5、觀察轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)的情況 

(三) 轉(zhuǎn)化反應(yīng) 
待轉(zhuǎn)化DNA的準(zhǔn)備 
我們需將連接混合物,提取的pUC18兩種樣品作轉(zhuǎn)化反應(yīng),按下表準(zhǔn)備

取上述兩組混合物在Eppendorf管中,按如下處理:
1、將各組Eppendorf管置冰浴/小時(shí)以上
2、把上述樣品置42℃水浴中,2分鐘
3、轉(zhuǎn)移到37℃水浴中5分鐘,加800μl LB液體培養(yǎng)基
4、在37℃搖床上振蕩培養(yǎng)1小時(shí),取25μl涂皿

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