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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
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細(xì)胞分離試劑
試劑盒

細(xì)胞融合技術(shù)介紹

時(shí)間:2016-12-27閱讀:1129
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細(xì)胞融合(cell fusion)或細(xì)胞雜交(cell hybridization)是指真核細(xì)胞通過介導(dǎo)和培養(yǎng),兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過程。人工的細(xì)胞融合開始于20世紀(jì)50年代, 60年代到70代作為一門新興的技術(shù), 發(fā)展非常快, 應(yīng)用范圍也極為廣泛, 除了同種類細(xì)胞間可以融合, 種間遠(yuǎn)緣細(xì)胞也能融合, 細(xì)胞與組織不同, 不排斥異類、異種細(xì)胞, 動(dòng)物細(xì)胞如此,植物細(xì)胞也是如此?;蛐拖嗤募?xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為同核體(homokaryon);來自不同基因型的雜交細(xì)胞則稱為異核體(heterokaryon)。 
目前, 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種:病毒(Okada, 1958)、聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)(Pontecorvo, 1975)和電激(Zimermann, 1980s)。副粘病毒科的病毒,如副流感病毒(Sendai virus)和新城雞瘟病毒,在其被膜中目前發(fā)現(xiàn)了兩種糖蛋白。較大的一種具有粘附細(xì)胞和凝血的作用;較小的一種可介導(dǎo)病毒同宿主細(xì)胞融合, 也可誘導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞融合,稱為融合蛋白(fusion protein)。人工利用病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合即是利用病毒的這一特性, 使用時(shí)先用紫外線將病毒滅活, 稀釋到一定濃度加入到細(xì)胞懸液中, 誘導(dǎo)細(xì)胞融合。但病毒介導(dǎo)細(xì)胞融合方法在使用前需要病毒的繁殖與滅活,操作繁瑣,如滅活不*則易對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害,因此現(xiàn)在一般不使用此方法。后兩種方法則是利用化學(xué)和物理手段,暫時(shí)使質(zhì)膜脂類分子的有序排列發(fā)生改變,待去掉作用因素之后,質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu),在恢復(fù)過程中便有可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合??傊?,這3種方法都是在相互接觸的兩細(xì)胞進(jìn)行自我修復(fù)過程中融合的。 
細(xì)胞融合不僅可用于生物學(xué)的基礎(chǔ)理論研究,而且在生產(chǎn)實(shí)踐上還有重要的應(yīng)用價(jià)值,如目前在單克隆抗體的制備, 核質(zhì)關(guān)系, 體細(xì)胞的遺傳和發(fā)育, 新品種的培養(yǎng), 免疫作用, 疾病的治療和性狀的改良, 潛伏病毒的研究等,已取得了顯著的成績(jī)。 
1.實(shí) 驗(yàn) 目 的 
1.1. 通過PEG介導(dǎo)的雞血細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn), 對(duì)體細(xì)胞融合有一個(gè)清楚的概念 
1.2. 并初步掌握利用PEG介導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)技術(shù) 
2.實(shí) 驗(yàn) 原 理 
利用PEG介導(dǎo)的動(dòng)物細(xì)胞融合,其實(shí)驗(yàn)原理到目前為止還沒有*定論。學(xué)者們一般認(rèn)為,PEG改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu),使兩細(xì)胞相互接觸部位的膜脂雙層中磷脂分子發(fā)生疏散、進(jìn)而使其結(jié)構(gòu)發(fā)生重排,再加上膜脂雙層的相互親合以及彼此間表面張力的作用,引起相臨的重排質(zhì)膜在修復(fù)時(shí)相互合并在一起, 使兩細(xì)胞的胞質(zhì)溝通, 從而造成相互接觸的細(xì)胞之間發(fā)生融合。 
利用PEG介導(dǎo)細(xì)胞融合, 其融合效果受以下幾種因素的影響。1. PEG的分子量與濃度: 細(xì)胞融合效果與PEG的分子量及其濃度成正比;但PEG的分子量越大、濃度越高, 對(duì)細(xì)胞的毒性也就越大。為了兼顧二者,在實(shí)驗(yàn)時(shí)常常采用的PEG分子量一般為1000~4000,濃度一般為40~60%。2. PEG的pH值: 經(jīng)驗(yàn)證,PEG的pH值在8.0~8.2之間融合效果。3. PEG的處理時(shí)間: 處理時(shí)間越長(zhǎng),融合效果越好, 但對(duì)細(xì)胞的毒害也就越大。故一般將處理時(shí)間限制在1分鐘之內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞融合后無需繼續(xù)培養(yǎng), 故處理時(shí)間可適當(dāng)放寬至數(shù)分鐘。4. 融合時(shí)的溫度: 由于生物膜膜的流動(dòng)性與溫度成正比,故細(xì)胞的融合效果也與溫度成正比。因此,為了獲得更好的融合效果, 在細(xì)胞可能承受的溫度范圍內(nèi)可適當(dāng)提高處理的溫度。對(duì)于哺乳動(dòng)物的細(xì), 一般采用的溫度為38~40℃。 
本實(shí)驗(yàn)所用材料為雞的血細(xì)胞,這是因?yàn)? 1. 雞血細(xì)胞具有細(xì)胞核,便于對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行鑒別;2. 實(shí)驗(yàn)材料便宜、易得。細(xì)胞融合與否,可通過觀察細(xì)胞內(nèi)核的數(shù)目來進(jìn)行鑒別。細(xì)胞內(nèi)只有一個(gè)核,定為未融合細(xì)胞;有二至多個(gè)核,定為融合細(xì)胞。

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