本試劑盒僅供研究使用。
1 使用目的：
本試劑盒用于檢測(cè)飼料和谷物中AFB1含量。
（AFB1）實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在微孔板包被有AFB1偶聯(lián)抗原，加入AFB1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離AFB1與微孔條上預(yù)包被的AFB1偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗AFB1抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止
液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，吸光值與樣品中AFB1含量成反比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中AFB1的含量。
3 試劑盒組成
3. 1 預(yù)包被的 AFB1偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1 塊（12 孔×8條）。
3. 2 AFB1標(biāo)準(zhǔn)品：6 瓶（1ml/ 瓶），含量分別是： 0 ng/ml ，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7
ng/ml,8.1 ng/ml。
3. 3 抗AFB1抗體酶結(jié)合物：1 瓶（6ml ）。
3. 4 顯色液 A：1 瓶（6ml ）。
3. 5 顯色液 B ：1 瓶（6ml ）。
3. 6 終止液：1 瓶（6ml ），2M 硫酸。
3. 7 *：1 瓶（10 × , 6 ml），用于樣品稀釋用。
3. 8 濃縮洗滌液：1 瓶（20×，20 ml），用于洗板。
3. 9 說(shuō)明書(shū)一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 設(shè)備
4.1.1波長(zhǎng)450nm 酶標(biāo)儀。
4.1.2粉碎機(jī)。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
（AFB1）貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8 ℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
6 注意事項(xiàng)
6.1 使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。
6.2 不要使用過(guò)期試劑盒。
2
6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時(shí)。
6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有AFB1，使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。
6.7 不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6.8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的*，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
6.9 混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。
7 工作液準(zhǔn)備
7.1 AFB1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1: 20（1+ 19） 稀釋備用
7.3 *：備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應(yīng)終止液：已備用
（AFB1）樣品處理程序（樣品在提取過(guò)程中，要嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則
會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70% 甲醇溶液
8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過(guò)濾
8.4取25 µl 處理后的樣品，加入25µl *于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）
9 酶免分析步驟
9.1 實(shí)驗(yàn)須知
9.1.1 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)?；販刂潦?br />溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8 ℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測(cè)的度和準(zhǔn)確度。
9.1.2 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8 ℃保存
9.1.3 請(qǐng)不要改變分析程序
9.1.4 請(qǐng)使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦開(kāi)始，請(qǐng)不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預(yù)*行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)
9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8 ℃保存
9.2.3 樣品稀釋液（10× ）、濃縮洗滌液（10× ）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml 標(biāo)準(zhǔn)品溶液
9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50µl 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl 樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl 的抗AFB1抗體酶結(jié)合物
9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液
體。
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