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原代細胞分離和培養(yǎng)基本步驟

2012年01月12日 09:38:09人氣:3813來源:上海酶聯(lián)生物研究所

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【資料簡介】

1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。

2、原代細胞的分離
(1)應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。
(2)根據(jù)組織來源不同,可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。

3、原代細胞的培養(yǎng):
(1)PriCells原代細胞特制培養(yǎng)基
(2)PriCells原代細胞特制添加物
(3)胎牛血清

4、細胞的培養(yǎng)和鑒定:
PriCells原代細胞鑒定試劑盒

4、原代細胞的傳代、保存
(1)傳代:依椐細胞的生長狀態(tài),生長的細胞1:2或1:3進行傳代。
(2)保存:DMSO+培養(yǎng)液+血清
按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃ 過夜)→液氮。

5、原代細胞的復蘇
(1)取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
(2)吸出細胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液。
(3)用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃ CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

 

上海酶聯(lián)生物研究所作者

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