人麻疹病毒（MV）說明書間接法

【資料簡介】

人 人人 人麻疹病毒 麻疹病毒 麻疹病毒 麻疹病毒（ （（ （MV） MV） MV） MV）酶聯(lián)免疫 酶聯(lián)免疫 酶聯(lián)免疫 酶聯(lián)免疫分析 分析 分析 分析（ （（ （ELISA） ）） ）     
試劑 試劑 試劑 試劑盒使用說明書 盒使用說明書 盒使用說明書 盒使用說明書     
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的 使用目的 使用目的 使用目的： ：： ：
本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中麻疹病毒  （MV）含量。
實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人麻疹病毒  （MV）水平。用純化的人麻疹病毒  （MV）抗
體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的麻疹病毒  （MV）
標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的麻疹病毒  （MV）待檢樣品，溫育后，加入*標(biāo)記的抗 IgG抗體，再
與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在
HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
麻疹病毒  （MV）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線
計(jì)算樣品中人麻疹病毒  （MV）濃度。  
試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成  
1  20 倍濃縮洗滌液  50ml×1 瓶  標(biāo)準(zhǔn)品 S1（160 IU/L）  0.5ml×1瓶
2  鏈霉親和素-HRP  6ml×1 瓶  標(biāo)準(zhǔn)品 S2（80 IU/L）  0.5ml×1瓶
3  酶標(biāo)包被板  12孔×8條  標(biāo)準(zhǔn)品 S3（40IU/L）  0.5ml×1瓶
4  *標(biāo)記的抗-IgG 抗體  6ml×1 瓶  標(biāo)準(zhǔn)品 S4（20 IU/L）  0.5ml×1瓶
5  顯色劑A 液  6ml×1 瓶
 
 
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標(biāo)準(zhǔn)品 S5（10IU/L）  0.5ml×1瓶  
6  顯色劑 B液  6ml×1/瓶  10  密封袋  1 個(gè)
7  終止液  6ml×1 瓶  11  封板膜  3 張
8  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  12  說明書  1 份
 
標(biāo)本要求 標(biāo)本要求 標(biāo)本要求 標(biāo)本要求  
1．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)
孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣
品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品 50µl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品 10µl 再加
入樣品稀釋液 40µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育
45 分鐘。
3.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
4.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 4次，拍干。
5.  加*標(biāo)記的抗-IgG 抗體：每孔加入*標(biāo)記的抗-IgG 抗體 50µl。37℃溫育 30 分
鐘 6.  洗滌：操作同 4。
7.  加鏈霉親和素-HRP：每孔加入 50µl 的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 30
分鐘。
8.  洗滌：操作同 4。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A 50µl，再加入顯色劑B 50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。  測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
計(jì)算 計(jì)算 計(jì)算 計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值待入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。  
注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值），請(qǐng)先將樣本
稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑 B請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
線形 線形 線形 線形范圍 范圍 范圍 范圍： ：： ：
7.5IU/L-160IU/L
規(guī)格 規(guī)格 規(guī)格 規(guī)格： ：： ：
96 人份/盒
保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月