豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9ELISA 檢測試劑盒操作步驟

【資料簡介】

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9ELISA 檢測試劑盒操作步驟

操作注意事項

1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9ELISA 檢測試劑盒

1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：

400 ng/ml	（6號標(biāo)準(zhǔn)品）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200 ng/ml	（5號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 ng/ml	（4號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 ng/ml	（3號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 ng/ml	（2號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5 ng/ml	（1號標(biāo)準(zhǔn)品）	100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml	（空白對照）	原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。異補(bǔ)骨脂素 Angelicin 20mg/支 HPLC≥98% 523-50-2
肉桂酸 桂皮酸；桂酸；皮酸 trans-Cinnamic acid 20mg/支 HPLC≥98% 140-10-3
肉桂醇 桂皮醇；苯丙烯醇；桂醇 Cinnamyl alcohol 20mg/支 HPLC≥98% 104-54-1
肉桂醛 Cinnamaldehyde 20mg/支 HPLC≥98% 104-55-2
果糖 Fructose 20mg/支 HPLC≥98% 7660-25-5
芒果苷 芒果甙 Mangiferin 20mg/支 HPLC≥98% 4773-96-0
新芒果苷 新芒果甙 Neomangiferin 20mg/支 HPLC≥98% 64809-67-2
DL-薄荷醇 DL-Menthol 20mg/支 HPLC≥98% 89-78-1
豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9ELISA 檢測試劑盒酪醇 對羥基苯乙醇; 4-羥基苯乙醇 Tyrosol 20mg/支 HPLC≥98% 501-94-0
（R型）人參皂苷Rh1 20（R）Ginsenoside Rh1 20mg/支 HPLC≥98% 89-78-1

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9ELISA 檢測試劑盒