大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫試劑盒使用說明書

【資料簡介】

大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫試劑盒概述  
內(nèi)皮素是一種由21個氨基酸組成的活性多肽，為目前已知縮血管活性zui強的物質(zhì)。在生理狀態(tài)下，由于內(nèi)皮細(xì)胞合成內(nèi)皮素很少且清除速度快，故血漿中內(nèi)皮素濃度很低。 但在內(nèi)皮細(xì)胞損傷、組織缺血缺氧等情況下，內(nèi)皮細(xì)胞大量合成內(nèi)皮素并釋放入血，成為參與疾病病理生理過程的重要體液因素。 實驗原理  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中內(nèi)皮素水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素、生物素化的抗大鼠內(nèi)皮素抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 
預(yù)期應(yīng)用  ELISA法定量測定大鼠血漿或其它相關(guān)液體中內(nèi)皮素1（ET-1）含量。 
大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫試劑盒試劑盒組成  
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）  
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，其濃度為10000 pg/mL，做 系列倍比稀釋后，分別稀釋成10000 pg/mL，5000 pg/mL ，2500 pg/mL，1250 pg/mL，625 pg/mL，312 pg/mL，156 pg/mL，其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/mL，臨用前15分鐘內(nèi)配制。  如配制5000 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml 10000 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。 5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。  
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液A1：100稀釋。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液B1：100稀釋。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。  
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。  
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。  
11.   標(biāo)本的采集及保存  
1．血清：標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。  
2．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。    
注：標(biāo)本溶血會影響zui后大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。