血液直擴(kuò)PCR試劑盒使用說明書

【資料簡介】

血液直擴(kuò)PCR試劑盒
Blood Direct Amplification PCR Kit
使用手冊(cè)V1.0

產(chǎn)品及特點(diǎn)    本產(chǎn)品是即用型PCR試劑盒2.0的改良產(chǎn)品，含有*的抗干擾Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2和反應(yīng)緩沖液等組成的Master Mix，額外提供的血液裂解試劑可以簡便快速地裂解動(dòng)物抗凝血液，并釋放出基因組DNA。整個(gè)過程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代謝物，也無需有機(jī)溶劑抽提，即可得到質(zhì)量穩(wěn)定的基因組DNA，無需后續(xù)純化步驟即可直接用于PCR擴(kuò)增鑒定。本產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1.    簡單快捷，無需提取動(dòng)物血液基因組DNA，可直接使用血液裂解混合液進(jìn)行PCR擴(kuò)增，極大地簡化了實(shí)驗(yàn)步驟。
2.    靈敏度高，1次可以處理100uL（含有核紅細(xì)胞的血液）或10uL（含無核紅細(xì)胞的血液）。
3.    兼容性強(qiáng)，可用于各種動(dòng)物血液。
4.    一站式，產(chǎn)品經(jīng)過優(yōu)化，不需要客戶單獨(dú)優(yōu)化每個(gè)成分。
規(guī)格及成分    成分    編號(hào)    100次紙盒包裝
溶液A    130852A    30 mL
溶液B    130852B    12 mL
溶液C    130852C    550 uL
溶液D    130852D    12 mL
血液直擴(kuò)PCR Mix    130852E    2×1 mL
去離子水        10 mL

自備試劑    超純水。
運(yùn)輸及保存    低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法    一：含有核紅細(xì)胞血液的預(yù)處理：
1.  將1-10uL的動(dòng)物血液置于新離心管中，加入95uL的溶液B和5uL的溶液C，渦旋5秒。
2.  56℃孵育10-30分鐘。
3.  95℃孵育5分鐘。
4.  再加入100uL的溶液D，渦旋混勻。
5.  2-8℃貯存血液裂解混合液。
該血液樣品可直接作為模板進(jìn)行PCR。
二：含無核紅細(xì)胞血液的預(yù)處理：
1.  將100uL的動(dòng)物血液置于新離心管中，加入250uL的溶液A，顛倒離心管5次。
2.  13000g離心60秒，棄去上清；向其中加入95uL的溶液B和5uL的溶液C，渦旋5秒后重懸沉淀。
3.  56℃孵育10分鐘。
4.  95℃孵育5分鐘。
5.  再加入100 uL的溶液D，渦旋混勻。
6.  2-8℃貯存血液裂解混合液。
該血液裂解混合液可直接作為模板進(jìn)行PCR。
二：PCR操作：
1.    設(shè)置PCR反應(yīng)（以25 uL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例）在一干凈的PCR管中，加入下列成分：
血液直擴(kuò)PCR Mix    12.5 uL
血液樣品    4 uL
自備引物一    0.5 uL
自備引物二    0.5 uL
補(bǔ)超純水到    25 uL
2.    放入PCR儀中進(jìn)行PCR，PCR循環(huán)參數(shù)是：
PCR前變性    94-95℃ 1-5分鐘    
PCR循環(huán)    94-95℃ 30秒    循環(huán)25-40次
    45-70℃ 10-30秒    
    72℃ 80秒    
PCR后延伸    72℃ 7分鐘    
zui終保存溫度    4-10℃    

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品    血液直擴(kuò)Taq DNA聚合酶