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葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒
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關 鍵 詞 | 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒 |
- 【資料簡介】
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
GOD (EC 1.1.3.4)廣泛存在于動物、 和植物中, 催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產生H2O2,
是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理
GOD催化產生H2O2,過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解產生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧
化生成有色物質,顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。
試驗中所需的儀器和設備
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸
餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 40 mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 8 mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 2 mL×1 支,4℃保存;
樣品測定的準備
組織處理:按照組織質量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,
加入 1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
血清(漿):直接檢測。
測定步驟
1、 分光光度計預熱 30min以上,調節(jié)波長至 500nm,蒸餾水調零。
2、 GOD 檢測工作液的配制:用時將試劑二和試劑三轉移至試劑一中,充分混勻,待用;
用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
3、測定前將GOD 檢測工作液在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴 10min以上。
4、在 1mL玻璃比色皿中加入 40μL樣本和 960μL工作液,立即混勻并計時,記錄 500nm下
20s吸光值 A1和 1min20s后的吸光值 A2。計算 ΔA=A2-A1。
GOD活力單位的計算
1、血清(漿)GOD 活力的計算
單位定義:每 mL血清(漿)每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109
]÷V樣÷T=3333×ΔA
2、動物組織GOD 活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位定義:每 mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109
]÷(V樣×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒單位定義:每 g組織每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/ g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109
]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3333×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積, 1×10-3
L; ε: 氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù), 7.5×103
L / mol /cm;
d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.04 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;
T:反應時間,1 min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒齊一生物現(xiàn)貨供應
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