常見問題:點擊了解更多熒光-PCR法。
一.沒有擴增產(chǎn)物
.循環(huán)溫度:變性溫度、退火溫度
2.引物設(shè)計
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA樣品
二.非特異產(chǎn)物及電泳呈涂布狀
.Mg2 濃度
2.調(diào)整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當(dāng)減少循環(huán)數(shù)
4.適當(dāng)提高退火溫度,縮短退火或延伸時間?
產(chǎn)品名稱 | 腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測試劑盒品牌 |
規(guī)格 | 48T/盒 |
分類 | 熒光-PCR法 |
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使用及效果:
PCR反應(yīng)特點
() 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=0-2g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。?氧雜環(huán)丁-3-醇 7748-36-9 25g Sephadex G-25 Medium 室溫保存
乙鈷 7-48-7 25g Sephadex G-50 Medium 室溫保存
乙 7335-65- 25g Sephadex G-75 Medium 室溫保存
乙烯基硼頻哪醇酯 75927-49-0 25g Sephadex LH-20 室溫保存
乙烯基三氯硅烷 75-94-5 00mL Sepharose 2B 4-8℃保存
2-乙烯氧基乙醇 764-48-7 00mL Sepharose 4B 4-8℃保存
異丙基丙二二乙酯 759-36-4 00mL Sepharose CL-2B 4-8℃保存
銀 7440-22-4 00mL Sepharose CL-4B 4-8℃保存
扎西他濱 748-89-2 00mL Sepharose CL-6B 4-8℃保存
,5-二羥基萘 83-56-7 0g L-Serine 室溫干燥保存
4-芐氧基芐 836-42-0 0mg Shikimic Acid 室溫干燥保存
維生素 B2 83-88-5 kg Silica Gel 室溫干燥保存
N-Boc-3-氨基丙基溴 83948-53-2 25g Silver Nitrate 室溫干燥避光保存
3-溴-2-氟苯 84048-82-5 g Sinapic Acid 室溫干燥保存
異丁基硼 840-40-7 5g Sirius Rosa BB 室溫保存
TOXO IgG 弓形蟲抗體 IgG(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
TOXO IgM 弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:50mg
TOXO IgM 弓形蟲抗體 IgM(捕獲法一步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
TOXO IgM 弓形蟲抗體 IgM(捕獲法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:50mg
HSV- I IgG 單純皰疹Ⅰ型病毒 IgG(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
HSV- I IgM 單純皰疹Ⅰ型病毒 IgM(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
HSV- I IgM 單純皰疹Ⅰ型病毒 IgM(捕獲法一步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:50mg
HSV- I IgM 單純皰疹Ⅰ型病毒 IgM(捕獲法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:50mg
HSV- II IgG 單純皰疹Ⅱ型病毒 IgG(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
HSV- II IgM 單純皰疹Ⅱ型病毒 IgM(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
HSV- II IgM 單純皰疹Ⅱ型病毒 IgM (捕獲法,一步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:50mg
HSV- II IgM 單純皰疹Ⅱ型病毒 IgM (捕獲法,二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:200mg
Anti-Ins 胰島素抗體(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:50mg
Anti-GAD 谷氨脫羧酶抗體(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:00mg
Ins 胰島素(間接法二步法) 進口/國產(chǎn)常溫,避光 規(guī)格:200mg
特點:
. 腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測試劑盒品牌即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
用途:
. 方便,用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷,操作步驟已經(jīng)限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
3. 本產(chǎn)品A 型含電泳染料,PCR 反應(yīng)液可直接上樣電泳,進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,反應(yīng)的靈敏度高,特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產(chǎn)物可直接用于T 載體克隆,不需要額外的加A 反應(yīng)。
使用及效果:將本產(chǎn)品5 μL 與用戶自備的模板,引物和水共5 μL 混合后,直接進行PCR反(PCR 參數(shù)由用戶自己確定),反應(yīng)結(jié)束后直接取0 μL 電泳檢查擴增結(jié)果。