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超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒說明書
2022-6-9 閱讀(922)
超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒說明書
規(guī)格：100T/48S
溶液的配制： 1、 試劑二：使用前先離心再吹打混勻。根據(jù)樣本量將試劑二用蒸餾水稀釋 10 倍后使用，當(dāng)天用完。 2、 試劑四：根據(jù)樣本量將試劑四用蒸餾水稀釋 5 倍后使用，當(dāng)天用完。
產(chǎn)品說明： SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生歧化作用，生 成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。 通過及氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)，O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜，后者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍色越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。 注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品： 可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、細(xì)胞超聲破碎儀、研缽/ 勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟： 一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻） 1. 細(xì)胞、細(xì)菌樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液， 超聲波破碎（功率 200w，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提 取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 3. 血清（漿）樣本：直接檢測。
三、SOD 活性計算 1、抑制百分率的計算 抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 測定) ÷ΔA 空白×100% 盡量使樣本的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi)，越靠近 50%越準(zhǔn)確。如果計算出來的抑制百分率小于 30%或大 于 70%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣本；如果測定出 來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測樣本或者提高操作表中樣本體積，同時減少相同的蒸餾水 體積。 2、SOD 酶活性單位：在上述氧化酶偶聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%時，反應(yīng)體系中的 SOD 酶活力定義 為一個酶活力單位。 3、SOD 酶活性計算： （1）血清（漿）SOD 活性（U/mL）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總] ÷V 樣×F =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×F （2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計算： a.按樣本蛋白濃度計算 SOD 活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總] ÷(V 樣×Cpr)×F =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F b.按樣本質(zhì)量計算 SOD 活性（U/g 質(zhì)量）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總] ÷(W×V 樣÷V 樣總)×F =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F c.按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算 SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總] ÷(500×V 樣÷V 樣總)×F =0.02×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中的樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積 1mL； Cpr：蛋白樣本濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；F：樣本稀釋倍數(shù)。
