ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。

【ELISA試劑盒需要遵循的3個(gè)要點(diǎn)】
1.抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性;
2.抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

【怎樣更好的發(fā)揮ELISA試劑盒的效果】
●在使用過程校正加樣器；10ul以下加樣器采用進(jìn)口產(chǎn)品（芬蘭、法國等）； 
● 仔細(xì)校正溫度到37℃，水浴箱為佳；
●必須使用去離子水或蒸餾水，不得用自來水、礦泉水等。
●認(rèn)真閱讀使用說明書。  樣品加樣  
● 加樣不準(zhǔn)確；  
●沒有混勻。  
●加樣時(shí)一定要仔細(xì)。加樣后，再檢查，以防漏加、錯(cuò)加。  
●加樣后，反復(fù)抽吸
●次混勻，防止血清聚集孔底，導(dǎo)致非特異性吸附。  洗滌  洗滌不*  
●每次注水洗滌，應(yīng)靜止30秒鐘；  
●選用吸水紙作為襯墊，每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分； 
●可選用塑料洗滌瓶。  加酶反應(yīng) 漏加 滴加后，認(rèn)真檢查各孔  結(jié)果判斷  
●包括陰性對照孔在內(nèi)，各孔顯色普遍偏深； 
●包括陽性對照在內(nèi)，各孔均無顯色；  
●陽性對照不顯色，而其它樣本顯色正常； 
●有些標(biāo)本顯色不深，判斷陽性困難。  
● 可能是洗滌不充分；加樣過量；溫育時(shí)間過長溫度過高；按說明書重新操作。如無改善， 可與生產(chǎn)廠家； 
●可能是漏加樣本或酶液；溫育時(shí)間過短溫度過低；試劑保存不當(dāng)活性下降；按說明書重新 操作。如無改善，可與生產(chǎn)廠家；  
●陽性對照漏加、錯(cuò)加或失效。重新操作。如無改善，可與廠家，索要對照品； 
● 重新操作。使用酶標(biāo)儀，測定光吸收度，按P/N值標(biāo)準(zhǔn)判斷。  ELISA試劑盒保存 保存不規(guī)范 一定要在2-8℃存放。不得過高，也不得凍存（凍存后，酶液將失效）。  對照品 對照品為凍干品 按對照管標(biāo)示，加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶，充分溶解混勻?？砂凑f明書使用。Elisa試劑盒瓶中齊全，質(zhì)量有保障。