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當前位置:上海一研生物科技有限公司>>技術文章>>TM-PEK的抽提方法
TM-PEK是一種新穎的膜蛋白制備試劑盒。它是用基于化學而非去污劑的方法來抽提膜蛋白,不需要超聲破碎、劇烈震蕩、超速離心或高溫孵育,這樣,目的蛋白受損的幾率就大大降低。而得到的蛋白組分適用于各種常見的蛋白分析,如活性分析、天然和變性的凝膠電泳、Western Blot、免疫沉淀和質譜等等。
膜蛋白通過許多疏水氨基酸殘基錨定在膜結構里面,因而很難溶解在水性緩沖液系統(tǒng)中。為了制備膜蛋白樣品,傳統(tǒng)的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。但去污劑處理會使膜蛋白喪失其天然結構,妨礙了膜蛋白的功能研究。
TM-PEK的抽提方法也很簡單,只有兩步。*步,利用抽提緩沖液1來透化細胞或勻漿的組織,通過離心將可溶(胞質)組分與不可溶(膜)組分分離開。第二步,利用抽提緩沖液2A或2B將膜蛋白從脂雙層中抽提出。抽提緩沖液2A與2B的區(qū)別在于主角不同,分別為TM-PEK試劑A和TM-PEK試劑B,不過Novagen并沒有說明這兩者的具體成分。抽提緩沖液2A非常溫和,適于脆弱的蛋白復合物。相比之下,2B則更為,適用于那些難對付的跨膜蛋白,特別是有多個跨膜區(qū)的頑固分子。哪怕是有7個跨膜區(qū)的Frizzled-4蛋白也能輕松搞定。你可以通過實驗摸索,根據(jù)目的蛋白的特點和下游應用來二選一。
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