層析法是一種物理分離方法。柱層析法是層析方法中的一個(gè)類型，分為吸附柱層析法和分配柱層析法。ELISA試劑盒

    吸附柱層析法是分離、純化和鑒定有機(jī)物的重要方法。它是根據(jù)混合物中各組分的分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)（極性）來(lái)選擇合適的吸附劑和洗脫劑，從而利用吸附劑對(duì)各組分吸附能力的不同及各組分在洗脫劑中的溶解性能不同達(dá)到分離目的。吸附柱層析法通常是在玻璃層析柱中裝入表面積很大、經(jīng)過(guò)活化的多孔性或粉狀固體吸附劑（常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠等）。當(dāng)混合物溶液流過(guò)吸附柱時(shí)，各組分同時(shí)被吸附在柱的上端，然后從柱頂不斷加入溶劑（洗脫劑）洗脫。由于不同化合物吸附能力不同，從而隨著溶劑下移的速度不同，于是混合物中各組分按吸附劑對(duì)它們所吸附的強(qiáng)弱順序在柱中自上而下形成了若干色帶。                     

    在洗脫過(guò)程中，柱中連續(xù)不斷地發(fā)生吸附和溶解的交替現(xiàn)象。被吸附的組分被溶解吸出來(lái)，隨著溶劑向下移動(dòng)，又遇到新的吸附劑顆粒，把組分從溶液中吸附出來(lái)，而繼續(xù)流下的新溶劑又使組分溶解而向下移動(dòng)，這樣經(jīng)過(guò)適當(dāng)時(shí)間移動(dòng)后，各種組分就可以*分開(kāi)，繼續(xù)用溶劑洗脫，吸附能力zui弱的組分隨溶劑首先流出，再繼續(xù)加溶劑直至各組分依次全部由柱中洗出為止，分別收集各組分。

    綠色植物如菠菜葉中的葉綠體含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類天然色素。這兩類色素都不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機(jī)溶劑提取。ELISA試劑盒

    葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相似的形式即葉綠素a(C55H72O5N4Mg)和葉綠素b(C55H70O6N4Mg)，其差別僅是葉綠素a中一個(gè)甲基被甲?；〈鷱亩纬闪巳~綠素b。它們都是吡咯衍生物與金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進(jìn)行光合作用所必需的催化劑。植物中葉綠素a 的含量通常是b 的3 倍。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團(tuán)，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于醚、石油醚等一些非極性的溶劑。

    胡蘿卜素（C40H56）是具有長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體，即a-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和γ-胡蘿卜素，其中β-胡蘿卜素含量zui多，也zui重要。在生物體內(nèi)，β-胡蘿卜素受酶催化氧化形成*。目前β-胡蘿卜素已可進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)，可作為* 使用，也可作為食品工業(yè)中的色素。

    葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物，它在綠葉中的含量通常是胡蘿卜素的兩倍。與胡蘿卜素相比，葉黃素較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。

    石油醚是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑。葉綠體中的四種色素在石油醚中的溶解度是不同的：溶解度高的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快；溶解度低的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得慢。溶解度zui高的是胡蘿卜素，它隨石油醚在濾紙上擴(kuò)散得zui快，葉黃素和葉綠素a的溶解度次之；葉綠素b的溶解度zui低，擴(kuò)散得zui慢。這樣，四種色素就在擴(kuò)散過(guò)程中分離開(kāi)來(lái)。

    同樣，提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力不同，當(dāng)用適當(dāng)?shù)娜軇┩苿?dòng)時(shí)，混合物中各成分在兩相（流動(dòng)相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，所以它們的移動(dòng)速度不同，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間層析后，便將混合色素分離。ELISA試劑盒

    本實(shí)驗(yàn)是用活性氧化鋁作吸附劑，分離菠菜中胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a和葉綠素b。