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細(xì)胞株的培養(yǎng)

時(shí)間:2016-4-6閱讀:399
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   選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn),有幾點(diǎn)建議可供參考: (1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞的培養(yǎng)基??梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn),或在購(gòu)買細(xì)胞株時(shí)咨詢。 (2)其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。 (3)根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基。如小

選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn),有幾點(diǎn)建議可供參考:

(1)建立某種細(xì)胞株所用的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞的培養(yǎng)基??梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn),或在購(gòu)買細(xì)胞株時(shí)咨詢。

(2)其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。

(3)根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選 RPMI1640 。

(4)用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)狀態(tài),可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇培養(yǎng)基,這是zui客觀的方法,但比較繁瑣。

     很多細(xì)胞生長(zhǎng)要求在培養(yǎng)液中添加*。*在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置于-20?C冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有*的液體培養(yǎng)基4?C 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),應(yīng)重新加入原來(lái)量的*。另一種選擇是使用L-*的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如啟維益成公司代理的GenDepot的產(chǎn)品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-*。Glutaplex與L-*相比更加穩(wěn)定,降解比較慢,提高細(xì)胞的存活和生長(zhǎng),極大降低對(duì)細(xì)胞有毒性的氨的積累。

3.培養(yǎng)基中是否應(yīng)加酚紅:

酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為pH值的指示劑,中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,特別是雌激素。為避免固醇類反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),應(yīng)使用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)不使用加酚紅的培養(yǎng)基。

4.使用血清應(yīng)注意的問(wèn)題:

1)血清*次使用前,是否應(yīng)在56oC,30分鐘加熱血清以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)?

激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染。而把血清放在37℃環(huán)境中又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量。

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