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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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- 型號 48T 0.1PCR管
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-16 12:16:44瀏覽次數(shù)：286
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實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：南芥菜花葉病毒（ArMV）RNAPCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100287
產(chǎn)品規(guī)格：48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
產(chǎn)品分類：PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。
棒桿菌Ⅰ型纖維生長因子結(jié)合蛋白2抗體Human DCAF12L1 (DDB1- and CUL4-associated factor 12-like protein 1) ELISA KIT色素b-245重鏈(CYBB)免疫試劑盒
意大利青霉肌動蛋白結(jié)合蛋白Fascin3抗體Human DDHD1 (Phospholipase DDHD1) ELISA KIT角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)免疫試劑盒
傳染性支氣管炎病結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1抗體Human CYBRD1 (Cytochrome b reductase 1) ELISA KIT(VD)免疫試劑盒
小石地放線菌FAM61B蛋白抗體Human PGK1(PhosphoglyceRate kinase 1) ELISA Kit(VC)免疫試劑盒
聚生殼菌FAM63A蛋白抗體Human DFNB31 (Whirlin) ELISA KIT12(VB12)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌上皮分泌型FAM3C蛋白抗體Human CYB5D1 (Cytochrome b5 domain-containing protein 1) ELISA KIT(VA)免疫試劑盒
木樨草青霉FAM36A蛋白抗體Human DQX1 (ATP-dependent RNA helicase DQX1) ELISA KIT唾液酸(SA)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌FAM50A蛋白抗體Human COA5 (Cytochrome c oxidase assembly factor 5) ELISA KIT褪黑素(MT)免疫試劑盒
蟲花棒束孢FAM134C蛋白抗體Human DAPK3 (Death-associated protein kinase 3) ELISA KIT銅鋅-過氧化物岐化酶(Cu/Zn-SOD)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體Human DFNB31 (Whirlin) ELISA KIT銅藍蛋白(CP)免疫試劑盒
白色念珠菌-質(zhì)控菌乙型肝炎病X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體Human PGK1(PhosphoglyceRate kinase 1) ELISA Kit甜菜堿-同型半S-甲基轉(zhuǎn)移酶1(BHMT)免疫試劑盒
羅氏鏈霉菌卵泡抑素相關(guān)蛋白5抗體Human DQX1 (ATP-dependent RNA helicase DQX1) ELISA KIT胎盤生長因子(PGF)免疫試劑盒
Bacillus anthracis叉頭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C2抗體Human CYB5D1 (Cytochrome b5 domain-containing protein 1) ELISA KIT羧化不全骨鈣素(ucOC)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Fbx15蛋白抗體Human DAPK3 (Death-associated protein kinase 3) ELISA KIT雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒
短桿菌屬FRMD2蛋白抗體Human MT-CO2 (Cytochrome c oxidase subunit 2) ELISA KIT瘦素(LEP)免疫試劑盒
球孢白僵菌FAM98B蛋白抗體Human COA5 (Cytochrome c oxidase assembly factor 5) ELISA KIT(SS)免疫試劑盒
南芥菜花葉病毒（ArMV）RNAPCR檢測試劑盒: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥98.5% (GC)
黑色鏈霉菌Streptomyces│niger 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99%(GC)6
木豆根瘤菌Rhizobium│sp. (Cajanus rhizabia) 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)2
花臉香蘑Lepista│sordida 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC ,≥99.5%(GC)12
泡盛曲霉Aspergillus│awamori 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)1
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥98.0%(GC)酸
