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抗原抗體反應(yīng)主要特點(diǎn)及影響因素
2022-11-14 閱讀(1174)
抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。特點(diǎn)有特異性、比例性、可逆性抗原抗體反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。特異性是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。
抗原抗體反應(yīng)的主要特點(diǎn)：
1、特異性：特定的抗體只能與特定的抗原（肽段/蛋白）結(jié)合，這在WB一抗二抗的種屬及反應(yīng)性的選擇常用到；
2、可逆性：抗原抗體的結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合，在一定條件下這種非共價(jià)結(jié)合是可逆的；因此，同一NC膜/PVDF膜在Stripping（抗體洗脫）以后可以用來檢測(cè)其他蛋白；
3、比例性：抗原抗體在整個(gè)反應(yīng)中存在一定的量比關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)可見反應(yīng)；WB中蛋白上樣量和一抗二抗的稀釋比例與此有關(guān)，實(shí)際操作中抗體的量相對(duì)較多，這也是為何抗體可以反復(fù)使用的原因之一；
4、階段性：抗原抗體特異性反應(yīng)分兩階段，第一階段反應(yīng)迅速，第二階段反應(yīng)緩慢，兩階段均為特異性結(jié)合；WB中抗原抗體結(jié)合在室溫下，反應(yīng)1小時(shí)結(jié)合率可達(dá)95%，2小時(shí)可達(dá)97%以上；4℃在，反應(yīng)4-6小時(shí)可達(dá)90%，8小時(shí)可達(dá)95%（本人忘記了具體的數(shù)值，但大致如此）。
影響抗原抗體反應(yīng)的三因素：
1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH 3～5和pH 5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使他們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集或沉淀現(xiàn)象：在抗原抗體反應(yīng)中，常用0.85%的NaCI溶液或各種緩沖液作為抗原、抗體的稀釋液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。
2、溫度：抗原抗體反應(yīng)必須在適宜的溫度中進(jìn)行，一般為15～40℃，通常最適為37℃。一定范圍內(nèi)，溫度升高，可促進(jìn)抗原抗體分子問的碰撞機(jī)會(huì)，加速抗原抗體復(fù)合物的形成，加快可見反應(yīng)的速度，若溫度高于56℃，可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；溫度越低，結(jié)合速度越慢，但結(jié)合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應(yīng)，對(duì)反應(yīng)溫度有特殊要求，如冷凝集素在4℃左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。3、
3、酸堿度：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的酸堿度環(huán)境中進(jìn)行，pH過高或過低都將影響抗原:抗體的理化性質(zhì)，抗原抗體反應(yīng)的最適酸堿度為pH 6～8。此外，當(dāng)pH達(dá)到或接近顆粒性抗原的等電點(diǎn)時(shí)，即使沒有相應(yīng)抗體存在時(shí)，也會(huì)引起抗原非特異性凝集，即自凝，造成假陽性反應(yīng)，嚴(yán)重影響試驗(yàn)的可靠性。
