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上海博湖生物科技有限公司
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實(shí)際篩選標(biāo)準(zhǔn)血清具體方法介紹
2024-1-8 閱讀(333)
現(xiàn)常用血清主要是牛血清、人血清、馬血清等。其中牛血清來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品質(zhì)高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。
血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
1. 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml
2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行
3. 血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl
4. pH。國(guó)產(chǎn)血清、大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，根據(jù)PH的高低可用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源
5. 微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無(wú)法過(guò)濾，很難全清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一。
在實(shí)際篩選時(shí)，主要從血清外觀和實(shí)驗(yàn)操作時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行。
從外觀上：
1. 顏色：根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)樘ヅＱ迥δ懿?，紅細(xì)胞容易破裂；
2. 澄清度：高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有影響，沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān)，在實(shí)驗(yàn)操作中可能會(huì)對(duì)細(xì)胞觀察產(chǎn)生影響。
從性能上：
1. 細(xì)胞形態(tài)，在進(jìn)行血清篩選時(shí)首先觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化，以及觀察貼壁細(xì)胞的貼壁情況，細(xì)胞在不同血清培養(yǎng)中可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)上的差異；
2. 倍增時(shí)間，一般情況下會(huì)選擇倍增時(shí)間短的血清，值得注意的是血清的影響會(huì)傳至5代，在進(jìn)行測(cè)試時(shí)，最好培養(yǎng)五代后進(jìn)行計(jì)倍增時(shí)間的計(jì)算。
