 |
上海博湖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒 |
聯(lián)系電話
18117197628
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 陳經(jīng)理
- 電話：
- 021-57763112
- 手機：
- 18117197628
- 售后電話：
- 18117197628
- 傳真：
- 86-021-57690166
- 地址：
- 上海閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈B102
- 郵編：
- 200000
- 個性化：
- www.shbhbio-e.com
原代細胞分離培養(yǎng)實驗流程
2024-11-18 閱讀(182)
原代細胞（Primary cells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養(yǎng)的細胞。原代細胞培養(yǎng)是指將組織從動物體內(nèi)取出，經(jīng)各種酶、螯合劑(常用EDTA) 或機械方法剪碎處理，分散成單細胞，在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖的過程。細胞的分離純化和細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學實驗的基礎(chǔ)。我們通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞。
原代細胞分離培養(yǎng)實驗流程:
首先將組織從機體中取出，經(jīng)yi 蛋白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
實驗流程:
1. 取材：將目標動物麻醉或處死，動物體上取出目標器官或組織。
2. 原代細胞的分離：獲取的組織或器官中含有血液和多種細胞，我們將獲取的組織或器官在無菌環(huán)境下充分剪碎，消化，分散成單細胞。根據(jù)目標細胞的特點選擇不同的篩選方法， 以獲得目標細胞。
3. 培養(yǎng)和鑒定：根據(jù)客戶的需求，爾丙生物將獲得的高純度原代細胞繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代培養(yǎng)，也可以凍存處理，滿足不同的實驗需求。
常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進行傳代。
下面介紹織塊培養(yǎng)法：
1. 操作步驟
（1）、在無菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）、用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）、再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）、用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml 青霉su、200μg/ml 鏈霉su）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。
（5）、用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。
（6）、2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 青霉su及100μg/ml 鏈霉su）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中。
（7）、輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（8）、 一般說來，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進行傳代培養(yǎng)。
2. 注意事項
（1）、如果是用培養(yǎng)瓶而不是培養(yǎng)皿，則接種組織塊千培養(yǎng)瓶底壁后， 要輕輕地翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，令瓶底在上，蓋好瓶蓋后輕輕置入37°C 的CO2 培養(yǎng)箱， 2~4h 后，取出培養(yǎng)瓶，在超凈工作臺內(nèi)打開瓶蓋，仍令組織塊在上方。在組織塊對面瓶壁加入適量上述培養(yǎng)液。然后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓組織塊浸沒于培養(yǎng)液中。蓋好瓶蓋后放回二氧化碳孵箱，繼續(xù)培養(yǎng)。
（2）、從培養(yǎng)皿表面游離下來的組織塊，棄去即可。
（3）、如果使用玻璃培養(yǎng)瓶，而不是新的塑料培養(yǎng)瓶，則最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾膠原，這樣不但有利于組織塊的黏附，而且可使細胞生長得更好。
（4）、本方法適于各種組織的培養(yǎng)，操作者還可根據(jù)自己的實驗需要和細胞種類加以修改。
