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上海博湖生物科技有限公司
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探討標(biāo)本對(duì)ELISA試驗(yàn)的影響
2024-12-9 閱讀(169)
探討標(biāo)本不同情況對(duì)ELISA試驗(yàn)的影響：
1. 溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗滌過(guò)程中往往難以洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基C6H6胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽(yáng)性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
2. 標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
3. 標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、造成假陽(yáng)性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測(cè)定，5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
4. 塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
好使用真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性。
5. 標(biāo)本凝固不全。 在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
綜上所述，標(biāo)本對(duì)ELISA試驗(yàn)的影響不容忽視。為了確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，我們應(yīng)重視標(biāo)本的采集、處理和保存等環(huán)節(jié)，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，并采取適當(dāng)?shù)拇胧﹥?yōu)化試驗(yàn)條件。
