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上海博湖生物科技有限公司
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決定PCR反應(yīng)特異性主要因素
2025-4-7 閱讀(75)
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。
PCR反應(yīng)特異性主要決定因素：
1、引物。引物的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度是PCR特異性的關(guān)鍵。此外，引物濃度過高會(huì)增大形成引物二聚體的概率，從而降低PCR特異性。
2、復(fù)性溫度。在Tm值允許范圍內(nèi)，選擇較高的復(fù)性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結(jié)合，提高PCR反應(yīng)的特異性。
3、延伸時(shí)間。延伸時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增帶的出現(xiàn)。
4、Mg2+濃度。Mg2+濃度對(duì)PCR擴(kuò)增的特異性有顯著影響。Mg2+濃度過高時(shí)，容易出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，使反應(yīng)特異性降低。
5、DNA聚合酶的種類和數(shù)量。不同種類的酶對(duì)PCR特異性的影響程度不同；酶的量過多更容易引起非特異性擴(kuò)增。
