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上海博湖生物科技有限公司
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進口ELISA試劑盒實驗原理及步驟
2021-2-24 閱讀(1179)
進口ELISA試劑盒實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）水平。用純化的兔氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL），再與HRP標記的羊抗兔抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）濃度。
進口ELISA試劑盒性能:
1．準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2．靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。
3．特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4．重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。
進口ELISA試劑盒操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
