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當(dāng)前位置:南京沃博生物科技有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)>>熒光染料>>13831Amplite™熒光法β-羥基丁酸(酮體)檢測

Amplite™熒光法β-羥基丁酸(酮體)檢測

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產(chǎn)品型號:13831

品       牌:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

所  在  地:南京市

更新時間:2020-04-07 15:45:31瀏覽次數(shù):306

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級別 超純、高純
β-羥基丁酸熒光測定試劑盒提供了靈敏的熒光測定法,用于測量生物樣品中的β-HB水平。

酮體是由肝臟產(chǎn)生的,當(dāng)血糖水平下降時,其外圍可用作能量來源。兩個主要的酮體是β-羥基丁酸酯(Beta-HB)和乙酰乙酸酯,而丙酮是第三大酮體。通常,在禁食和長時間運(yùn)動期間,這兩個主要的酮體在血液中的含量很少。在患有糖尿病,酒精或水楊酸鹽中毒,激素缺乏癥,兒童低血糖癥和其他急性疾病的患者中,血液中會發(fā)現(xiàn)大量的酮體。血液中酮體的過度產(chǎn)生和積累(酮癥)可導(dǎo)致病理性代謝性酸中毒(酮癥酸中毒)。在情況下,酮癥酸中毒可能是致命的??梢粤炕?beta;-HB的血酮測試方法 血液中的主要酮體(約75%)已用于診斷和監(jiān)測酮酸中毒的治療。Amplite™熒光β-羥基丁酸熒光測定試劑盒提供了靈敏的熒光測定法,用于測量生物樣品中的β-HB水平。該測定基于β-HB的酶偶聯(lián)反應(yīng),其中產(chǎn)物NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行特異性監(jiān)測。熒光信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用這種熒光β-羥基丁酸熒光測定試劑盒,我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM Beta-HB。該測定基于β-HB的酶偶聯(lián)反應(yīng),其中產(chǎn)物NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行特異性監(jiān)測。熒光信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用這種熒光β-羥基丁酸熒光測定試劑盒,我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM Beta-HB。該測定基于β-HB的酶偶聯(lián)反應(yīng),其中產(chǎn)物NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行特異性監(jiān)測。熒光信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用這種熒光β-羥基丁酸熒光測定試劑盒,我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM Beta-HB。

熒光酶標(biāo)儀
激發(fā)540納米
發(fā)射590納米
隔斷570納米
推薦板純黑色

 

組分A:酶混合物2瓶(凍干粉)
組分B:測定緩沖液1瓶(10毫升)
成分C:NAD1個小瓶
組分D:β-羥基丁酸(β-HB)標(biāo)準(zhǔn)1小瓶(10 µL)
  1. 準(zhǔn)備β-HB標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品(50 µL)
  2. 加入β-HB工作溶液(50 µL)
  3. 在室溫下孵育10-30分鐘
  4. 監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm時的熒光增加

重要說明
為了獲得*效果,強(qiáng)烈建議使用黑色印版。開始實(shí)驗(yàn)前,在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。

儲備溶液的制備

除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣,并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. NAD儲備溶液(100X):
將100 µL H 2 O加入NAD小瓶(組分C)中,制成100X NAD儲備溶液。

2.β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mM):
將1 mL H 2 O或1X PBS緩沖液加到β-HB標(biāo)準(zhǔn)瓶(組分D)中,制成100 mMβ-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見,請使用我們的系列稀釋計

將10 µL的β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mM)加入990 µL 1x PBS緩沖液中,以生成1000 µM的β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液(HB7)。取1000 µMβ-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液,并在1x PBS中進(jìn)行1:3連續(xù)稀釋,以獲得β-HB標(biāo)準(zhǔn)(HB6-HB1)的連續(xù)稀釋液。注意:稀釋的β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定,應(yīng)在4小時內(nèi)使用。

準(zhǔn)備工作溶液

1.將5 mL測定緩沖液(組分B)加入一瓶酶混合物(組分A)中。

2.將50 µL NAD儲備溶液添加到組分A + B的瓶子中,并充分混合以制成β-HB工作溶液(組分A + B + C)。注意:此β-HB工作溶液不穩(wěn)定,請立即使用,并避免直接暴露在光線下。

程序

表1.在透明的底部96孔微孔板中的β-HB標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。HB =β-HB標(biāo)準(zhǔn)品(HB1-HB7,1至1000 µM);BL =空白對照;TS =測試樣品。

BLBLTSTS
乙肝1乙肝1......
乙肝2乙肝2......
乙肝3乙肝3  
乙肝4乙肝4  
乙肝5乙肝5  
乙肝6乙肝6  
乙肝7乙肝7  

表2.每個孔的試劑組成。

體積試劑
HB1-HB750微升連續(xù)稀釋(1至1000 µM)
BL50微升1X PBS緩沖液
TS50微升測試樣品
  1. 根據(jù)表1和表2提供的布局,將β-HB標(biāo)準(zhǔn)品(HB),空白對照(BL)和測試樣品(TS)制成黑色96孔微孔板。對于384孔板,請使用25 µL每孔試劑,而不是50 µL。
     
  2. 將50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB標(biāo)準(zhǔn)品,空白對照和測試樣品的每個孔中,以使總體積為100 µL /孔。對于384孔板,將25 µLβ-HB工作溶液添加到每個孔中,總體積為50 µL /孔。
     
  3. 在避光條件下,于室溫下孵育反應(yīng)10-30分鐘。
     
  4. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm,發(fā)射= 590-600 nm(*Ex / Em = 540/590 nm,在570 nm截止)下監(jiān)測熒光的增加。

數(shù)據(jù)分析

1e+4100010010010- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™β-Hydroxybutyrate (uM)RFUHover mouse to interact

從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)(RFU)用作陰性對照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后,繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù),以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程式。該方程可用于計算β-羥基丁酸酯樣品。

FITC-Phalloidin

鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動

ER-Tracker Blue

本品為ER-Tracker Blue-White

ER-Tracker Gree

本品為ER-Tracker Red (BODIPY

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