免疫原

klh偶聯(lián)合成肽:RRT*VKSTPQS，其中T*表示phospho-Thr

主機(jī)的兔子

單克隆多克隆

親和純化的血清在PBS, ph7,4

格式凍干

數(shù)量25µg

再加入25µl的無菌水

-20°C保存凍干/重組;一旦重組，使公平，以避免重復(fù)凍融循環(huán)，請記住，在打開之前，旋轉(zhuǎn)管短暫，以避免任何損失，凍干材料粘附在瓶蓋或管的兩側(cè)

Western blot (WB)

推薦稀釋倍數(shù)1:10 000 (WB)

預(yù)期|表觀MW

擬南芥為25 kDa

分別用3X LB (6 M尿素、12% SDS、30%甘油、100 mM DTT、150 mM Tris pH7.0、0.8% Comassie g -250)增溶1µg擬南芥野生型和突變體的類囊體膜。負(fù)載1µg總?cè)~綠素，在16%的SDS-PAGE上進(jìn)行分離，然后在硝化纖維素膜上印跡2 h。用奶粉封閉印跡2小時(shí)，然后在一抗溶液(AS13 2705, 1:5 000)中孵育2.5小時(shí)，然后換瓶，在TBST中洗滌3次，5分鐘。將二抗(兔IgG馬蘿卜過氧化物酶共軛)稀釋至1:10 000，孵育膜1小時(shí)，然后按上述步驟洗滌。所有的過渡步驟都是在室溫(RT)攪拌下進(jìn)行的。根據(jù)制造商的說明，用ECL沖洗膜5分鐘，然后用富士膠片CCD相機(jī)記錄，增加時(shí)間為30秒，大約5分鐘