用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。
原代細(xì)胞可用來轉(zhuǎn)染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內(nèi)的小分子 RNA 和 DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞。目前，無論國外還是國內(nèi)，原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個熱點(diǎn)難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細(xì)胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。對于大多數(shù)原代細(xì)胞，RFect PM 細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率都在80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%。
原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本步驟：
1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。
2、原代細(xì)胞的分離
(1)應(yīng)用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒I、II、III。
(2)根據(jù)組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒。
3、原代細(xì)胞的培養(yǎng)：
(1)PriCells原代細(xì)胞特制培養(yǎng)基
(2)PriCells原代細(xì)胞特制添加物
(3)優(yōu)質(zhì)胎牛血清
4、細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：
PriCells原代細(xì)胞鑒定試劑盒
5、原代細(xì)胞的傳代、保存
(1)傳代：依椐細(xì)胞的生長狀態(tài)，生長的細(xì)胞1：2或1：3進(jìn)行傳代。
(2)保存：DMSO+培養(yǎng)液+血清
按下列順序降溫：室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。
6、原代細(xì)胞的復(fù)蘇
(1)取出細(xì)胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。
(2)吸出細(xì)胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。
(3)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
