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貨號	XG-X3472	生長特性	半貼半懸
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

運(yùn)輸和保存：

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

商品信息：

名稱產(chǎn)品	NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞	產(chǎn)品別稱	H446; H-446; NCI-446; NCIH446
種屬	人	生長特性	半貼半懸
培養(yǎng)基	RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
貨號	XG-X3472	組織來源	肺；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌；小細(xì)胞肺癌

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）生長培養(yǎng)基:

RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

背景描述 NCI-H446細(xì)胞是從一位小細(xì)胞肺癌患者的胸水中建立的，NCI-H446細(xì)胞的原始形態(tài)并不具有小細(xì)胞肺癌特征。NCI-H446細(xì)胞是小細(xì)胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種，表達(dá)神經(jīng)元有的烯醇酶和腦部肌酸激酶同功酶。NCI-H446細(xì)胞內(nèi)旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達(dá)到可檢測水平。C-myc DNA序列擴(kuò)增約20倍，c-myc RNA比正常細(xì)胞增加15倍。最初，傳代培養(yǎng)基用RPMI-1640(含5%胎牛血清、10nM氫化KE的松、0.005mg/ml胰島素、0.01mg/ml鐵傳遞蛋白、10nM 17-β-雌二醇、30nM亞硒SUAN鈉)。

年齡（性別）男性；61歲

組織來源肺；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌；小細(xì)胞肺癌

細(xì)胞類型腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型肺癌細(xì)胞

生物安全等級 BSL-1

致瘤性 Yes, in nude mice (The cells form transplantable tumors with non-typical SCLC histology).

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-171

NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠睪丸支持細(xì)胞	人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒
小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	人神經(jīng)細(xì)胞粘著分子(NRCAM)檢測試劑盒elisa
大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)試劑盒 ELISA
大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	貓血支原體PCR試劑盒
小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	鐮刀瘧原蟲(惡性瘧原蟲)PCR試劑盒
小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	衣阿華支原體PCR檢測試劑盒
小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	同性戀螺桿菌PCR檢測試劑盒
小鼠腸間質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	番瀉葉探針法PCR鑒定試劑盒
小鼠腸間質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	五倍子探針法PCR鑒定試劑盒
人支氣管平滑肌細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	新兇手弗朗西斯菌PCR檢測試劑盒
人支氣管平滑肌細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	鵝螺旋體病PCR檢測試劑盒
貓主動脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒
貓主動脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	新城疫病毒中強(qiáng)毒(NDV-W)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
雞腎小管上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞線頸線蟲PCR檢測試劑盒
雞腎小管上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基	青少年2型血色su沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2ELISA試劑盒

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。