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真正的解決方案----懸浮細(xì)胞/微珠高通量篩選
高內(nèi)涵篩選通過(guò)提供豐富的數(shù)據(jù)促進(jìn)藥物的開發(fā)，成為藥物研發(fā)過(guò)程的常規(guī)流程。然而高內(nèi)涵篩選僅僅局限于貼壁細(xì)胞，無(wú)法觸及到更多的重要研究領(lǐng)域，美國(guó)InliCyt推出iQue Screener篩選系統(tǒng)可分析懸浮細(xì)胞和微珠，為當(dāng)今的篩選實(shí)驗(yàn)提供快速的高內(nèi)涵的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

• 通過(guò)對(duì)懸浮細(xì)胞進(jìn)行高通量的功能性篩選，增加表型篩選實(shí)驗(yàn)中小分子藥物開發(fā)的效率；
• 通過(guò)同時(shí)獲取抗原結(jié)合和交叉反應(yīng)的數(shù)據(jù)，從抗體開發(fā)研究中獲得更好的雜交瘤信息，并且篩選目標(biāo)都保持在它們的自然構(gòu)型狀態(tài)中。
• 確保更多的體外毒性的預(yù)測(cè)結(jié)果可通過(guò)全自動(dòng)的、多終點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得到，這種實(shí)驗(yàn)每秒可分析上千個(gè)獨(dú)立細(xì)胞的健康特性。

 整合的解決方案

*整合儀器、軟件和試劑盒的篩選解決方案，使研究者可以用篩選的速度和效率分析懸浮細(xì)胞。
iQue^TM Screener如何運(yùn)行
iQue^TM篩選系統(tǒng)是高通量的、基于流式細(xì)胞儀的篩選平臺(tái)，運(yùn)送一個(gè)連續(xù)的樣本流給檢測(cè)器，后者從單個(gè)的細(xì)胞中收集多重讀數(shù)。這種*的進(jìn)樣方法可將細(xì)胞或其他內(nèi)含物以連續(xù)的、空氣間隔的方法，從微孔板中輸送到流式細(xì)胞儀中，以確保準(zhǔn)確的跟蹤，并將交叉污染zui小化。zui終的檢測(cè)結(jié)果只需要幾分鐘，而不是幾個(gè)小時(shí)，并能以易于解讀的熱圖（heat map）形式形成基于微孔板的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。


iQue^TM Screener的特點(diǎn)
更高的實(shí)驗(yàn)效率

• 在幾天內(nèi)篩選您的文庫(kù)，而不是幾個(gè)月
• 進(jìn)樣體積可低至1µL，減少試劑的成本
• 可在3min內(nèi)運(yùn)行一塊96孔板，在12min內(nèi)運(yùn)行一塊384孔板
• 可以與機(jī)械臂和其他自動(dòng)工作單元相整合
• 兼容細(xì)胞、微珠和它們的混合物

更多的生理相關(guān)性

• 可對(duì)不同細(xì)胞的混合物進(jìn)行分析，讀取單個(gè)細(xì)胞數(shù)據(jù)
• 可篩選懸浮細(xì)胞，并篩選自然構(gòu)象的目標(biāo)物
• 用四個(gè)熒光通道收集多重讀數(shù)
• 可檢測(cè)非標(biāo)記目標(biāo)物的尺寸和粒度

 
更穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
 

• 6個(gè)數(shù)量級(jí)的檢測(cè)范圍可提供靈敏和可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
• 10,000個(gè)獨(dú)立的細(xì)胞，可得到每孔內(nèi)的更好的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

 
更易于使用

• 完整的工作流程的支持
• 分析實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)
• 生成即時(shí)報(bào)告
• 即插即用的應(yīng)用特異性試劑盒

超高通量，您強(qiáng)勁的幫手
應(yīng)用
抗體開發(fā)（Antibody Discovery）

• 雜交瘤篩選（Hybridoma Screening）
• 決定種系間的交叉反應(yīng)性（Determining Species Cross-Reactivity）
• 評(píng)估抗體分泌細(xì)胞系的生產(chǎn)效率（Assessing Productivity of Antibody-Secreting Cell Lines）
• 篩選人生殖細(xì)胞IgG庫(kù)（Screening a Human Germline IgG Library）

體外毒性實(shí)驗(yàn)（In Vitro Toxicology）

• 微核誘導(dǎo)的定量（Quantification of Micronucleus Induction）
• 凋亡事件的檢測(cè)（Detection of Apoptotic Events）

表型篩選（Phenotypic Screening）

• 對(duì)誘導(dǎo)骨髓祖細(xì)胞分化的化合物的篩選（Screening for Compounds that Induce Myeloid Progenitor Cell Differentiation）
• 多重細(xì)胞系的GFP表達(dá)篩選（GFP Expression Screening in Multiple Cell Lines） 
   

抗體開發(fā)
InliCyt的篩選系統(tǒng)結(jié)合MultiCyt試劑盒，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)終點(diǎn)，有助于對(duì)克隆庫(kù)里的抗體進(jìn)行高通量的鑒別和描述。此外，應(yīng)用懸浮細(xì)胞進(jìn)行分析的能力，使目標(biāo)物質(zhì)能在它們的自然構(gòu)型下進(jìn)行篩選，從而能獲得更好的雜交瘤的信息。 
雜交瘤篩選
InliCyt的篩選系統(tǒng)和MultiCyt Hybridoma Screening Kit試劑盒的結(jié)合使用，可以優(yōu)化整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程。這種混合然后檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法消除了初篩中現(xiàn)有的很多步驟，能同時(shí)評(píng)估抗原的結(jié)合和交叉反應(yīng)特性。

目標(biāo)細(xì)胞（未標(biāo)記）和對(duì)照細(xì)胞（鈣黃綠素標(biāo)記）混合在一起并分布在微孔板中。然后加入雜交瘤庫(kù)中的被測(cè)抗體，和帶紅色熒光的檢測(cè)抗體一起孵育。然后用iQue分析微孔板，同時(shí)檢測(cè)雜交瘤懸浮液中的抗體和目標(biāo)細(xì)胞、對(duì)照細(xì)胞群體的結(jié)合。和對(duì)照細(xì)胞的結(jié)合表現(xiàn)了交叉反應(yīng)性和非特異性結(jié)合性，為每個(gè)孔的實(shí)驗(yàn)提供了內(nèi)部對(duì)照。

未處理的細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)使抗體篩選可以在有構(gòu)象的表位上進(jìn)行，這在ELISA和其他純化蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中是無(wú)法做到的，因?yàn)榭乖诩兓倪^(guò)程中會(huì)經(jīng)常失去折疊而失活。
決定種系間的交叉反應(yīng)性
InliCyt篩選系統(tǒng)的多重功能可以將抗體的跨種系反應(yīng)活性融入到研發(fā)的篩選流程中。MultiCyt Cell Encoder Kit試劑盒允許每孔同時(shí)檢測(cè)五種細(xì)胞系。該實(shí)驗(yàn)?zāi)苋菀椎罔b定出能與多種種系的目標(biāo)抗原發(fā)生交叉反應(yīng)的高度合適的克隆，這些克隆就是臨床前研究的更強(qiáng)有力的候選物。

親代細(xì)胞系和經(jīng)過(guò)基因工程改造的能表達(dá)小鼠、大鼠、獼猴和人類受體的細(xì)胞系被分別標(biāo)記并混合在一個(gè)樣本中。其中，未轉(zhuǎn)染的親代細(xì)胞系作為每個(gè)樣本的陰性結(jié)合對(duì)照。樣本被加入96孔微孔板進(jìn)行抗體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，然后依次加入初篩檢測(cè)抗體和二篩檢測(cè)抗體。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)樣本的細(xì)胞系得到確認(rèn)，并被單獨(dú)評(píng)估，生成結(jié)合親和力曲線。該實(shí)驗(yàn)4塊96孔微孔板中進(jìn)行，得到了4種不同實(shí)驗(yàn)條件下的12種抗體，8個(gè)劑量的曲線，所有實(shí)驗(yàn)在1小時(shí)內(nèi)完成。
評(píng)估抗體分泌細(xì)胞系的生產(chǎn)效率
InliCyt篩選系統(tǒng)的多重功能和Multi-Cyt IgG Count and Capture Kit試劑盒合用，可提高成功確認(rèn)高生產(chǎn)率細(xì)胞系的機(jī)會(huì)。在單個(gè)實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)同時(shí)檢測(cè)分泌的抗體量、細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞活性獲得單個(gè)細(xì)胞的抗體水平。

樣本中分泌的抗體結(jié)合到捕獲微珠上，被熒光標(biāo)記的檢測(cè)試劑所檢測(cè)。加入一種特異性標(biāo)記非活性細(xì)胞的染料，以確定活性細(xì)胞和非活性細(xì)胞的比值。分析微孔板，每個(gè)樣本同時(shí)記錄三個(gè)讀數(shù)：分泌的抗體的水平，總細(xì)胞數(shù)目和非活性細(xì)胞的百分比。這樣就能容易的算出每個(gè)細(xì)胞分泌的抗體水平。
篩選人生殖細(xì)胞IgG庫(kù)
用InliCyt篩選系統(tǒng)可以進(jìn)行篩選方法的開發(fā)，這種篩選方法適合細(xì)胞表面表達(dá)的抗原，并能檢測(cè)多重終點(diǎn)。Fabrus Inc.公司（San Diego, California）開發(fā)了一個(gè)人生殖細(xì)胞Fab庫(kù)，并進(jìn)行了大約10,000個(gè)IgG對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面目標(biāo)抗原的直接篩選。其使用HTFC篩選系統(tǒng)進(jìn)行，使目標(biāo)IgG可以在脂質(zhì)細(xì)胞膜表面的天然環(huán)境中進(jìn)行篩選。

細(xì)胞用GFP和目標(biāo)抗原進(jìn)行短暫共轉(zhuǎn)染，然后每一個(gè)群組，表達(dá)三個(gè)不同目標(biāo)抗原中的一個(gè)，用一定數(shù)量的鈣黃綠素作為細(xì)胞編碼染料進(jìn)行標(biāo)記。轉(zhuǎn)染好的標(biāo)記細(xì)胞被物理混合成單個(gè)樣本，分裝在微孔板上，進(jìn)行針對(duì)這些樣本的IgG庫(kù)的篩選。GFP的信號(hào)用來(lái)確認(rèn)細(xì)胞是否表達(dá)了抗原，細(xì)胞編碼染料使三種細(xì)胞能同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以確認(rèn)和分析每一個(gè)目標(biāo)物。GFP陰性的細(xì)胞作為不表達(dá)目標(biāo)抗原的內(nèi)部陰性對(duì)照。結(jié)合在細(xì)胞上的IgG用熒光進(jìn)行二次檢測(cè)，并且對(duì)每一個(gè)染色的群組進(jìn)行了評(píng)估。
體外毒性實(shí)驗(yàn)
IntlliCyt的篩選系統(tǒng)可在1秒鐘內(nèi)分析溶液中幾千個(gè)細(xì)胞的健康性能，使用MultiCyt試劑盒全自動(dòng)的簡(jiǎn)化工作流程為藥物開發(fā)提供早期的有關(guān)基因毒性的篩選途徑。
微核誘導(dǎo)的定量
在InliCyt的篩選系統(tǒng)上進(jìn)行體外微核實(shí)驗(yàn)，用Litron（羅切斯特，紐約）的體外MicroFlow Kit試劑盒可以可靠地檢測(cè)基因毒性化合物引起的懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的微核的改變。384微孔板結(jié)合自動(dòng)化分析時(shí)，原來(lái)需要16個(gè)小時(shí)才能完成的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在只要30分鐘就能完成，使微核誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)?zāi)苓_(dá)到篩選級(jí)別的高通量。
檢測(cè)凋亡事件
InliCyt的系統(tǒng)、軟件和應(yīng)用試劑盒被優(yōu)化和確認(rèn)來(lái)對(duì)多重凋亡終點(diǎn)進(jìn)行識(shí)別和特征描述。同時(shí)或以不同的組合方式監(jiān)控Caspase 3，Annexin V，線粒體去極化，細(xì)胞活性和細(xì)胞數(shù)目等指標(biāo)，以得到各終點(diǎn)間的更好的相關(guān)性和更完整的凋亡進(jìn)程圖。復(fù)雜的細(xì)胞混合物也能被監(jiān)控，以獲得不同的差異效率。

表型篩選
對(duì)誘導(dǎo)骨髓祖細(xì)胞分化的化合物的篩選
InliCyt篩選系統(tǒng)可以篩選克服原骨髓祖細(xì)胞的分化停滯的生物相關(guān)化合物，并能容易地確定能刺激干細(xì)胞分化的化合物，同時(shí)消除顯示細(xì)胞毒性的化合物。

細(xì)胞系來(lái)源于基因改造小鼠，該小鼠在溶菌酶啟動(dòng)子的控制下表達(dá)GFP：分化的細(xì)胞表達(dá)GFP（GFP+），未分化的細(xì)胞不表達(dá)GFP（GFP-）。同時(shí)篩選350,000個(gè)化合物作用下的細(xì)胞活性、細(xì)胞數(shù)目和綠色熒光。通過(guò)測(cè)量每個(gè)孔的前向散射，側(cè)向散射和細(xì)胞數(shù)目，無(wú)須活性染料就可確定毒性化合物，并同時(shí)確定GFP+。微孔板熱圖（Plate heat maps）能同時(shí)研究能誘導(dǎo)分化的化合物（用GFP陽(yáng)性的細(xì)胞表示）（GFP+ plate）、細(xì)胞毒性（用細(xì)胞的損失來(lái)表示）和包含多重參數(shù)的比值（創(chuàng)造出來(lái)用于設(shè)定篩選標(biāo)準(zhǔn)）。
多重細(xì)胞系的GFP表達(dá)篩選
和許多已知的GFP模型相兼容，InliCyt的篩選系統(tǒng)能在懸浮和貼壁細(xì)胞上進(jìn)行高通量群組的表型分析。可以確定和定量暫時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞群組中的表達(dá)GFP的細(xì)胞。

簡(jiǎn)化群組的表型篩選流程使多重終點(diǎn)能被連續(xù)的分析，得到更多數(shù)據(jù)（如：活細(xì)胞的GFP信號(hào)），或作為單一的終點(diǎn)被平行分析（細(xì)胞存活百分比和細(xì)胞表達(dá)百分比）。

對(duì)微孔板的每個(gè)樣本，多重?cái)?shù)據(jù)可產(chǎn)生更加生物相關(guān)的信息以進(jìn)行數(shù)據(jù)評(píng)估。Lipofectamine（LF2K）轉(zhuǎn)染試劑對(duì)HepG2細(xì)胞的三倍（triplicate）實(shí)驗(yàn)。