依據(jù)WHO要求，應(yīng)當(dāng)用小鼠攻毒試驗檢測狂犬病疫苗效價。該實驗方法zui早起源于美國國立衛(wèi)生研究院（NIH），因此該實驗也被稱為NIH檢測。在該檢測中，通過與疫苗標(biāo)準(zhǔn)品的比較，來檢測一種疫苗對于狂犬病毒感染的保護(hù)力。在歐洲，NIH檢測被強制應(yīng)用于人用狂犬病疫苗效價的檢測，一種改進(jìn)的檢測程序則推薦應(yīng)用于獸用狂犬病疫苗的效價檢測。

歐洲藥典規(guī)定用以下的程序檢測滅活的獸用狂犬病疫苗效價。包括標(biāo)準(zhǔn)參考品疫苗在內(nèi)的待檢測疫苗至少設(shè)置3個稀釋度，每個稀釋度分組至少檢測10個動物。各個稀釋度分組中每支小鼠腹腔免疫0.5ml。免疫后的第14天，所有小鼠腦內(nèi)注射至少10 LD50劑量的狂犬病毒。記錄死亡或者表現(xiàn)狂犬病癥狀的小鼠的數(shù)量，然后根據(jù)小鼠的存活率計算相對效價。只有當(dāng)小鼠攻毒試驗符合歐洲藥典規(guī)定的一系列標(biāo)準(zhǔn)時，該實驗才被認(rèn)為具有檢測的效力。只有當(dāng)一種疫苗效價每劑至少達(dá)到1 IU時，該疫苗才符合要求。

NIH檢測由于其不性以及顯著的變異性被業(yè)界廣泛批評。已經(jīng)報道，NIH檢測結(jié)果在實驗室內(nèi)和實驗室間差異的曾有報導(dǎo)高達(dá)10倍。而且，該實驗不能滿足統(tǒng)計學(xué)方面的所有要求也是共性的問題。某一擁有長期檢測經(jīng)驗的*參考實驗室報道，42%的NIH疫苗效價檢測試驗不能符合試驗有效性標(biāo)準(zhǔn)。而且，NIH檢測在倫理學(xué)和實踐性方面也是受到質(zhì)疑的。首先，該實驗采用腹腔注射導(dǎo)致試驗動物嚴(yán)重的損傷。其次，對照組和接種zui低稀釋度疫苗組的實驗動物產(chǎn)生狂犬病癥狀，zui終在攻毒試驗中死亡。而且，NIH檢測需要很多實驗動物，費時（4周）而且價格不菲。此外，在攻毒實驗中存在實驗室工作人員暴露的風(fēng)險。

1984年WHO專家咨詢委員會意識到，目前的狂犬病疫苗效價檢測方法不能提示新疫苗的免疫保護(hù)力，并且明確提出改進(jìn)或者替代NIH檢測的要求。其它的機構(gòu)亦要求替代小鼠攻毒試驗。一種適宜的備選方法應(yīng)該滿足以下的要求：1.　對實驗動物造成更少的損傷而且所需動物數(shù)量更少。2. 更少的試驗不確定性。3. 更快而且更容易操作。

根據(jù)歐洲藥典要求，作為小鼠攻毒試驗的替代，血清學(xué)檢測可以被用于常規(guī)獸用狂犬病疫苗效價檢測。該血清學(xué)檢測每組至少免疫5只小鼠，免疫的劑量推薦為1/5檢測疫苗劑量或者在小鼠攻毒預(yù)試驗中摸索出的一系列令人滿意的疫苗稀釋度。免疫途徑可以是皮下或者肌肉注射。注射后的第14天，采集血樣，并且通過RFFIT來檢測每個樣品中的狂犬病毒中和抗體。只有當(dāng)一種疫苗免疫產(chǎn)生的中和抗體效價不少于標(biāo)準(zhǔn)品疫苗產(chǎn)生的中和抗體效價時，該疫苗才符合效價要求。

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血清學(xué)檢測很顯然地帶給實驗動物更少的損傷，需要更少的實驗動物。但是，到目前為止，這種試驗方法還沒有被疫苗制造商和*實驗室廣泛采用。幾個研究機構(gòu)已經(jīng)證實NIH檢測中小鼠的存活率與用RFFIT或者血清中和試驗檢測的小鼠狂犬病毒中和抗體效價有很好的相關(guān)性。RFFIT被進(jìn)一步證明是一種具有很高重復(fù)性的試驗方法。它通過測定狂犬病毒中和抗體保護(hù)培養(yǎng)細(xì)胞免遭狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)攻擊毒株感染的能力，來檢測血清狂犬病毒中和抗體效價。然而，目前還沒有關(guān)于歐洲藥典推薦的兩種檢測方法（NIH和RFFIT）之間的全面比較。

在本研究中，我們驗證了小鼠攻毒實驗結(jié)果與歐洲藥典規(guī)定的血清學(xué)檢測結(jié)果之間的相關(guān)性。而且，我們已經(jīng)證實，血清學(xué)檢測對常規(guī)疫苗質(zhì)控的適宜性以及檢測不符合質(zhì)控要求的低效價疫苗的能力。此外，我們研究了這種替代方法的可行性，確定了應(yīng)當(dāng)優(yōu)化的實驗參數(shù)。本研究的總的目標(biāo)是推進(jìn)用血清學(xué)檢測替代小鼠攻毒試驗檢測。