來自擬南芥AUX1蛋白序列的klh偶聯(lián)肽。UniProt: Q96247, TAIR: AT2G38120

主機山羊

單克隆多克隆

在ph7,4的PBS中親和純化的血清

格式凍干

量50µg

存儲

凍干/復配保存在-20°C;一旦重組，就進行分配，以避免反復的凍融循環(huán)。

請記住，在打開管道之前，要簡短地旋轉管道，以避免任何可能發(fā)生的損失，從凍干材料粘附到帽或管的側面。

免疫定位(IL)，免疫印跡(WB)

重組AUX1的推薦稀釋倍數(shù)為1:250 - 1:700 (IL)， 1:5000 (WB)

擬南芥AUX1通過桿狀病毒感染在昆蟲細胞中表達。表達由強多面體啟動子驅動。Sf9細胞培養(yǎng)(20ml，約;2 × 107細胞)感染病毒，MOI分別為0.1、1和2.5。3天后，取2 mL樣品，離心，4℃裂解(20 mM Tris/HCl, pH 7.4, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% Tween 20，蛋白酶抑制劑和DNAseI) 30分鐘，超聲(3 x 5 s脈沖)，然后離心。使用8 - 13%的丙烯酰胺梯度凝膠在SDS-PAGE上清樣品(全細胞裂解液)。膜轉移到PVDF后，用10%奶粉的TBS-Tween阻膜過夜。一抗在TBS-Tween中與5%奶粉按1:50 000稀釋，室溫下使用1小時，在TBS-Tween中洗滌x3個各10分鐘，二抗(如AS09 605兔抗山羊HRP偶聯(lián)抗體Agrisera)按上述1:10 000稀釋。如上所述洗滌后，用Millipore Immobilon Transfer試劑ECL顯影2分鐘，ImageQuant獲取圖像。作為陰性對照，將未感染細胞(NC)樣本與AUX1提取物以及蛋白大小標記物(Mr)一起檢測。

在接近60kda處檢測到完整的融合蛋白(增強的GFP-AtAUX1)，在略高于40kda處也檢測到斷裂或截斷條帶。